Differenza chiave – Pagina SDS vs Western Blot
Il Western blotting è una tecnica che rileva una specifica proteina da un campione di proteine. Questa tecnica viene eseguita attraverso diversi passaggi chiave: elettroforesi su gel, blotting e ibridazione. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato (Pagina SDS) è una sorta di tecnica di elettroforesi su gel che viene utilizzata per separare le proteine in base alle loro dimensioni (pesi molecolari). Western blot è un foglio speciale di una membrana assorbente che viene utilizzata per trasferire lo stesso schema delle proteine nella pagina SDS. Il differenza fondamentale tra SDS Page e western blot è quello SDS Page consente la separazione delle proteine in una miscela mentre il western blot consente il rilevamento e la quantificazione di una proteina specifica da una miscela. Entrambi sono utili negli studi di analisi delle proteine.
Cos'è la pagina SDS?
SDS Page è una tecnica di elettroforesi su gel utilizzata per la separazione delle proteine. È comunemente usato in biochimica, genetica, medicina legale e biologia molecolare. Una volta estratte le proteine dal campione, vengono eseguite su un gel composto da SDS e poliacrilammide. SDS è un detergente anionico che viene utilizzato per linearizzare le proteine (proteine di denaturazione) e per conferire una carica negativa alle proteine linearizzate proporzionale alla loro massa molecolare. Il poliacrilammide diventa il solido supporto del gel. Le proteine denaturate che sono caricate negativamente migrano verso l'estremità positiva dell'apparato attraverso il gel. A seconda delle dimensioni delle proteine, le velocità di migrazione differiscono tra le proteine e si verifica la separazione. Pertanto, la pagina SDS è utile per la separazione delle singole proteine in base alle loro dimensioni.
La preparazione del gel di poliacrilammide per il frazionamento delle proteine è un passaggio cruciale nella pagina SDS. La corretta concentrazione di poliacrilammide e il tipo di reticolante utilizzato influiscono fortemente sulle proprietà fisiche del gel, che determina la vera e propria separazione delle diverse proteine. Le dimensioni dei pori del gel devono essere gestite correttamente per una separazione efficace. Tuttavia, SDS Page è considerata una tecnica di separazione delle proteine ad alta risoluzione.
La tecnica della pagina SDS ha un grosso limite nell'analisi delle proteine. Poiché l'SDS denatura le proteine prima della separazione, non consente il rilevamento di attività enzimatica, interazioni di legame proteico, cofattori proteici, ecc.
Figura 01: Pagina SDS
Cos'è Western Blot?
La tecnica di Western blotting consente di rilevare una specifica proteina da una miscela proteica e di misurare la quantità e il peso molecolare della proteina. Western blot è la membrana utilizzata durante la procedura di blotting per ottenere l'immagine speculare dei pattern proteici nel gel di poliacrilammide SDS. La membrana utilizzata per il western blotting è costituita principalmente da nitrocellulosa o polivinilidene difluoruro (PVDF). La membrana con la proteina trasferita può essere utilizzata per identificare la proteina desiderata. Richiede anticorpi di alta qualità per il rilevamento della proteina desiderata mediante ibridazione. L'anticorpo si lega al suo antigene specifico e rivela la presenza dell'antigene desiderato che è una proteina.
Il trasferimento delle proteine dal gel di poliacrilammide SDS al western blot viene eseguito mediante elettroblotting. È un metodo efficace e veloce che provoca l'elettroforesi delle proteine fuori dal gel e il passaggio sulla membrana di nitrocellulosa (western blot).
Figura 02: Western Blot
Qual è la differenza tra Pagina SDS e Western Blot?
Pagina SDS vs Western Blot |
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| SDS Page è una tecnica di elettroforesi su gel. | Western blot è una tecnica che viene eseguita su una membrana per rilevare una specifica proteina da una miscela. |
| Usa | |
| La pagina SDS consente la separazione delle proteine in base alle loro dimensioni. | Western blot consente il trasferimento di proteine sul gel della pagina SDS senza modificarne il pattern e consente l'ibridazione con anticorpi specifici. |
| Svantaggi | |
| La denaturazione delle proteine, il costo elevato e la presenza di sostanze chimiche neurotossiche sono gli svantaggi di questa tecnica. | Questa tecnica richiede molto tempo e richiede una buona esperienza personale e specifiche condizioni controllate. |
Riepilogo – Pagina SDS vs Western Blot
La pagina SDS e il western blot sono due metodi coinvolti nell'analisi delle proteine. SDS Page consente una facile separazione delle proteine su un gel in base al loro peso molecolare. Western blot aiuta a confermare la presenza e la quantità di una specifica proteina attraverso l'ibridazione con anticorpi specifici. Questa è la differenza tra la pagina SDS e il western blot.
