La differenza fondamentale tra FPLC e HPLC è che FPLC è un tipo di cromatografia liquida che purifica grandi biomolecole come proteine, nucleotidi e peptidi, mentre HPLC è un tipo di cromatografia liquida che separa composti di piccolo peso molecolare.
La cromatografia liquida è una tecnica utilizzata per separare un campione nei suoi singoli componenti. Questa separazione si verifica a causa dell'interazione di campioni specifici con fasi mobili e stazionarie. I componenti all'interno di un campione vengono separati in base all'affinità di ciascun componente per la fase mobile nella cromatografia liquida. Quando la fase mobile e il campione passano attraverso una colonna, i componenti del campione iniziano a separarsi in bande che possono essere rilevate dalla spettroscopia UV-VIS. Pertanto, FPLC e HPLC sono due tipi di tecniche di cromatografia liquida.
Cos'è l'FPLC?
FPLC è un tipo di cromatografia liquida che purifica grandi biomolecole come proteine, nucleotidi e peptidi. La cromatografia liquida proteica veloce (FPLC) è stata sviluppata e commercializzata per la prima volta in Svezia dalla società Pharmacia nel 1982. Viene spesso utilizzata per analizzare o purificare miscele proteiche. Ciò avviene in base al principio delle affinità dei componenti del campione per il fluido in movimento (fase mobile) e un materiale solido poroso (fase stazionaria). In FPLC, la fase mobile è un tampone e la fase stazionaria è una resina composta da perline. Di solito è costituito da agarosio reticolato confezionato in una colonna cilindrica di vetro o plastica.
Figura 01: Apparato FLPC (cromatografia liquida a proteine veloci)
Nella maggior parte della strategia FLPC, viene utilizzata la resina a scambio ionico. Pertanto, la proteina di interesse si legherà alla resina mediante un'interazione di carica. La tecnica FLPC utilizza anche due buffer: il buffer 1 (il buffer in esecuzione) e il buffer 2 (il buffer di eluizione). Inizialmente, quando la miscela di tampone e campione scorre attraverso la colonna, la proteina di interesse nella miscela si legherà alla resina mediante un'interazione di carica. Ma la proteina di interesse si dissocia e ritorna alla soluzione nel tampone di eluizione quando il tampone di eluizione scorre attraverso la colonna alla fine del processo. Successivamente, la soluzione (eluente che contiene proteine di interesse) passa attraverso due rivelatori, che misurano la concentrazione di sale e la concentrazione di proteine. Quando ogni proteina viene eluita, appare come un "picco" durante il rilevamento e può essere raccolta per un ulteriore utilizzo.
Cos'è l'HPLC?
HPLC è un tipo di cromatografia liquida che separa i composti di piccolo peso molecolare. Nel 1969, il primo HPLC è stato prodotto commercialmente da Waters Corporation, USA. Nella cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), una miscela campione (analita) in un solvente (fase mobile) viene pompata attraverso una colonna con materiale di riempimento cromatografico (fase stazionaria) ad alta pressione. La miscela del campione è trasportata da un flusso di gas di trasporto in movimento di elio o azoto.
Figura 02: HPLC (cromatografia liquida ad alte prestazioni)
I componenti nella miscela campione che hanno la minor quantità di interazione con la fase stazionaria o la maggior parte di interazione con la fase mobile usciranno dalla colonna più velocemente. D' altra parte, i componenti nella miscela campione che hanno la maggior quantità di interazione con la fase stazionaria o la minor quantità di interazione con la fase mobile usciranno dalla colonna più lentamente. Sulla base del principio di interazione di cui sopra, i componenti della miscela campione possono essere separati. Inoltre, il rivelatore dello strumento identifica ogni componente della miscela campione che esce dalla colonna. L'HPLC viene utilizzato per ispezionare campioni ambientali e biologici per la presenza o l'assenza di composti noti, come farmaci, tossine o pesticidi. Viene utilizzato in diversi settori come quello farmaceutico, ambientale, forense e chimico.
Quali sono le somiglianze tra FPLC e HPLC?
- FPLC e HPLC sono tipi di cromatografia liquida.
- Entrambi sono usati per separare e identificare campioni biologici.
- Hanno una fase mobile liquida e una fase stazionaria solida.
- Entrambe le tecniche utilizzano una colonna per passare attraverso il campione.
- Queste tecniche utilizzano pompe, rivelatori, valvole e software per la separazione e il rilevamento dei campioni.
Qual è la differenza tra FPLC e HPLC?
FPLC è un tipo di cromatografia liquida che viene utilizzata per purificare grandi biomolecole come proteine, nucleotidi e peptidi. L'HPLC è un tipo di cromatografia liquida che viene utilizzata per separare composti di piccolo peso molecolare. Quindi, questa è la differenza chiave tra FPLC e HPLC. Inoltre, FPLC utilizza monitor di pH e conducibilità, nonché collettori di frazioni. Al contrario, HPLC non utilizza monitor di pH e conducibilità e collettori di frazioni.
L'infografica di seguito elenca più differenze tra FPLC e HPLC in forma tabellare.
Riepilogo – FPLC vs HPLC
La cromatografia è una tecnica analitica di laboratorio utilizzata per la separazione dei componenti da una miscela. È diviso in diversi tipi come cromatografia su colonna, gascromatografia, cromatografia liquida, cromatografia a scambio ionico, ecc. FPLC e HPLC sono due tipi di tecniche di cromatografia liquida. FPLC è un tipo di cromatografia liquida che viene utilizzata per purificare grandi biomolecole come proteine, nucleotidi e peptidi. D' altra parte, l'HPLC è un tipo di cromatografia liquida che viene utilizzata per separare composti di piccolo peso molecolare. Quindi, questo è il riassunto di qual è la differenza tra FPLC e HPLC.
