La differenza chiave tra HPLC a fase inversa e fase normale è che l'HPLC a fase inversa utilizza una fase stazionaria non polare e una fase mobile polare mentre l'HPLC a fase normale utilizza una fase stazionaria polare e una fase mobile meno polare.
L'HPLC in fase normale è la più antica tecnica di HPLC utilizzata da Tswett nelle sue separazioni di estratti vegetali; ha usato il gesso in una colonna di vetro. Questa è stata la modalità classica di cromatografia che ha portato a nominarla come la tecnica "normale". L'HPLC in fase inversa, d' altra parte, è l'opposto della tecnica normale, che gli scienziati hanno sviluppato di recente.
Cos'è l'HPLC in fase inversa?
L'HPLC in fase inversa è una tecnica cromatografica in cui utilizziamo una fase stazionaria idrofobica. Tra tutti i metodi HPLC, utilizziamo questo metodo per circa il 70% a causa della sua ampia applicabilità e riproducibilità. La fase stazionaria è apolare e la fase mobile è polare.
Il più delle volte, gli scienziati usano una miscela acquosa di acqua con un solvente organico polare miscibile, come acetonitrile o metanolo come fase mobile. Pertanto, gli analiti interagiscono con la fase stazionaria non polare.
Cos'è l'HPLC in fase normale?
L'HPLC in fase normale è una tecnica cromatografica in cui utilizziamo una fase stazionaria idrofila. È il metodo tradizionale di HPLC, anche se non lo usiamo molto. La fase stazionaria è polare e la fase mobile è apolare. Ancora più importante, la fase mobile di questa tecnica è organica al 100%. Significa che non viene utilizzata acqua per questo.
Figura 01: un profilo del campione per cromatogrammi HPLC in fase normale e in fase inversa in base alla polarità dei componenti nell'analita.
In genere, la fase stazionaria contiene silice, ciano, diolo, fasi legate amminiche, ecc. Le fasi mobili includono solventi organici come esano, acetato di etile, ecc. Questa tecnica si basa sulla ritenzione di molecole di solvente o analita sulle fase stazionaria polare.
Qual è la differenza tra HPLC in fase inversa e fase normale?
L'HPLC in fase inversa è una tecnica cromatografica in cui utilizziamo una fase stazionaria idrofobica. La fase stazionaria di questa tecnica è non polare mentre la fase mobile è polare. Inoltre, gli scienziati utilizzano una miscela acquosa di acqua con un solvente organico polare miscibile, come acetonitrile o metanolo, come fase mobile nell'HPLC in fase inversa. Al contrario, l'HPLC in fase normale è una tecnica cromatografica in cui utilizziamo una fase stazionaria idrofila. La fase stazionaria di questa tecnica è polare mentre la fase mobile è non polare. Inoltre, gli scienziati utilizzano solventi organici come esano, acetato di etile, ecc. come fase mobile dell'HPLC in fase normale. L'infografica di seguito presenta la differenza tra HPLC in fase inversa e in fase normale in forma tabellare.
Riepilogo – HPLC in fase inversa vs fase normale
Le tecniche HPLC in fase inversa e in fase normale sono due tecniche cromatografiche liquide. Il differenza fondamentale tra HPLC in fase inversa e fase normale è quello l'HPLC in fase inversa utilizza una fase stazionaria non polare e una fase mobile polare mentre l'HPLC in fase normale utilizza una fase stazionaria polare e una fase mobile meno polare.
