La differenza fondamentale tra RP HPLC e HIC è che RP HPLC utilizza una fase mobile più polare e una fase stazionaria meno polare. Considerando che, HIC utilizza una fase stazionaria idrofobica che consente alle molecole idrofobiche di attaccarsi ad essa.
La cromatografia è una tecnica analitica che aiuta a separare una miscela nei suoi componenti. Innanzitutto, dobbiamo sciogliere il campione da separare in una soluzione. Questa miscela soluzione-sostanza è chiamata fase mobile. Quindi la fase mobile viene fatta passare attraverso un altro materiale chiamato fase stazionaria. La fase stazionaria determina la separazione dei componenti. La separazione avviene a causa della ripartizione del materiale tra la fase mobile e la fase stazionaria.
Cos'è RP HPLC?
Il termine RP HPLC sta per cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa. Implica la separazione dei componenti in una miscela, secondo l'idrofobicità. I componenti idrofobici nella fase mobile si legano con i ligandi idrofobici immobilizzati sulla fase stazionaria, mentre i componenti idrofili eluiscono attraverso la fase stazionaria senza attaccarsi alla superficie della fase stazionaria.
Figura 01: Apparecchio HPLC
Inoltre, questo metodo ha una maggiore riproducibilità rispetto ad altre tecniche cromatografiche e mostra anche un'ampia applicabilità. Pertanto, utilizziamo questo metodo nei laboratori per oltre il 75% di tutti i metodi HPLC. La maggior parte delle volte, utilizziamo una miscela acquosa di acqua con un solvente organico polare miscibile come fase mobile. Pertanto, garantirà il fissaggio dei componenti idrofobici nella soluzione alla superficie della fase stazionaria.
Cos'è HIC?
Il termine HIC sta per Hydrophobic Interaction Chromatography. È un tipo di HPLC a fase inversa e questo metodo viene utilizzato principalmente per la separazione di grandi biomolecole come le proteine. In questo metodo, abbiamo bisogno di utilizzare un mezzo acquoso per fare il campione della biomolecola. È perché i solventi organici possono causare la denaturazione delle proteine. Inoltre, questa tecnica utilizza l'interazione tra grandi molecole con una superficie leggermente idrofobica della fase stazionaria. Inoltre, dobbiamo utilizzare un'elevata concentrazione di sale nel campione perché favorisce il trattenimento della proteina sulla confezione; questo processo è chiamato salatura. Diminuendo gradualmente la concentrazione di sale, possiamo far eluire le biomolecole separatamente in base alla loro idrofobicità.
Di solito, questo metodo utilizza le condizioni opposte a quelle della cromatografia a scambio ionico. In questa tecnica, in primo luogo, dobbiamo far passare una soluzione tampone attraverso la colonna per ridurre la solvatazione del soluto nel campione. Rende le regioni idrofobiche della proteina da esporre. Tuttavia, quando la molecola è più idrofobica, è necessario meno sale per promuovere il legame. Qui, i soluti meno idrofobici vengono eluiti per primi e, in base alla variazione della concentrazione di sale, vengono eluiti più soluti idrofobici per ultimi.
Qual è la differenza tra HPLC RP e HIC?
La cromatografia è una tecnica analitica per la separazione dei componenti in una miscela. RP HPLC e HIC sono due tecniche cromatografiche specializzate. Il differenza fondamentale tra RP HPLC e HIC è quello RP HPLC utilizza una fase mobile più polare e una fase stazionaria meno polare, mentre HIC utilizza una fase stazionaria idrofobica, che consente alle molecole idrofobiche di attaccarsi ad essa.
L'infografica qui sotto riassume la differenza tra RP HPLC e HIC.
Riepilogo – HPLC RP vs. HIC
La cromatografia è una tecnica analitica per la separazione dei componenti in una miscela. RP HPLC e HIC sono due tecniche cromatografiche specializzate. Il differenza fondamentale tra RP HPLC e HIC è quello RP HPLC utilizza una fase mobile più polare e una fase stazionaria meno polare, mentre HIC utilizza una fase stazionaria idrofobica, che consente alle molecole idrofobiche di attaccarsi ad essa.
