Differenza chiave: immunofluorescenza vs immunoistochimica
La diagnostica delle malattie, che utilizza metodi di biologia molecolare, è diventata un'area emergente della tecnologia di laboratorio clinico. Include tutti i test e i metodi per identificare una malattia e comprenderne la causa analizzando il DNA, l'RNA o le proteine espresse in un organismo. I rapidi progressi nella diagnostica molecolare hanno consentito la ricerca di base sulle malattie trasmissibili e non trasmissibili. Questi sono usati per determinare i cambiamenti nella sequenza o nei livelli di espressione in geni o proteine cruciali coinvolti nella malattia. L'immunofluorescenza (IF) e l'immunoistochimica (IHC) sono due di queste tecniche ampiamente utilizzate nella biologia del cancro. IF è un tipo di IHC in cui un metodo di rilevamento della fluorescenza viene utilizzato per analizzare gli anticorpi monoclonali e policlonali, mentre IHC utilizza metodi basati su sostanze chimiche per rilevare gli anticorpi monoclonali e policlonali. Questa è la differenza fondamentale tra IF e IHC.
Cos'è l'immunofluorescenza (IF)?
L'immunofluorescenza è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel test vengono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine fluorescenti a scopo di rilevamento. Gli anticorpi secondari etichettati possono provocare segnali di fondo indesiderati; pertanto, la tecnica IF si basa attualmente sull'etichettatura dell'anticorpo primario stesso al fine di evitare segnali indesiderati durante il rilevamento. Attraverso questa tecnica, viene impedito il legame non specifico tra l'anticorpo primario e quello secondario ed è più rapido in quanto non è coinvolta alcuna fase di incubazione secondaria. Anche la qualità dei dati è migliorata.
Figura 01: Doppia colorazione con immunofluorescenza per BrdU, NeuN e GFAP
I fluorocromi o coloranti fluorescenti sono composti che possono assorbire la radiazione, preferibilmente la radiazione ultravioletta eccitata. Quando le particelle raggiungono lo stato fondamentale dallo stato eccitato, emettono radiazioni che vengono catturate e rilevate da un rivelatore per formare uno spettro. È di grande importanza che l'etichetta fluorescente sia compatibile e stabile per la particolare reazione e che sia adeguatamente coniugata all'anticorpo per ottenere risultati accurati. Uno dei fluorocromi più utilizzati è l'isotiocianato di fluoresceina (FITC), che è di colore verde, con lunghezze d'onda di picco di assorbimento ed emissione rispettivamente di 490 nm e 520 nm. La rodamina, un altro agente utilizzato in IF, è di colore rosso e ha lunghezze d'onda di picco di assorbimento ed emissione distinte di 553 nm e 627 nm.
Cos'è l'immunoistochimica (IHC)?
IHC è un metodo di analisi molecolare praticato per identificare e confermare la presenza dell'antigene nella cellula bersaglio. La cellula bersaglio potrebbe essere una particella infettiva, un agente patogeno microbico o una cellula tumorale maligna. IHC utilizza anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni presenti sulla superficie cellulare delle cellule bersaglio. La tecnica si basa sul legame antigene-anticorpo. Un marcatore di rilevamento è coniugato a questi anticorpi per rilevare la presenza o l'assenza del particolare antigene. Questi marcatori possono essere marcatori chimici come enzimi, anticorpi marcati in modo fluorescente o anticorpi marcati radio.
Figura 02: fetta di cervello di topo macchiata dall'immunoistochimica
L'applicazione più popolare dell'IHC è nella biologia delle cellule tumorali per identificare la presenza di tumori maligni, ma viene anche utilizzata per il rilevamento di malattie infettive.
Quali sono le somiglianze tra immunofluorescenza e immunoistochimica?
- L'immunofluorescenza e l'immunoistochimica avvengono in condizioni in vitro.
- Entrambe le tecniche si basano sull'antigene-anticorpo
- Sono entrambe tecniche molto rapide.
- I risultati delle tecniche sono riproducibili.
- Entrambi hanno migliorato la qualità dei dati.
- Queste tecniche utilizzate nella diagnostica del cancro e delle malattie infettive.
Qual è la differenza tra immunofluorescenza e immunoistochimica?
Immunofluorescenza vs Immunoistochimica |
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| IF è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel test vengono etichettati utilizzando coloranti fluorescenti o proteine fluorescenti per il rilevamento. | IHC è una tecnica di rilevamento in cui gli anticorpi utilizzati nel test sono etichettati utilizzando sostanze chimiche o elementi radioattivi per il rilevamento. |
| Precisione | |
| La precisione è maggiore nella tecnica IF rispetto all'IHC. | La precisione è inferiore in IHC. |
| Specificità | |
| IF è più specifico. | IHC è meno specifico. |
Riepilogo – Immunofluorescenza vs Immunoistochimica
I meccanismi molecolari hanno portato molti cambiamenti nel campo della medicina, dando vita a metodi di test molecolari avanzati che hanno portato a rivoluzioni nel campo della diagnostica. Queste invenzioni hanno portato a una rapida e accurata identificazione e conferma della malattia, consentendo così la corretta somministrazione e produzione di farmaci. Queste tecniche sono utilizzate anche in farmacologia per trovare i bersagli dei farmaci e per confermare le proprietà farmacocinetiche del farmaco durante il metabolismo del farmaco. IF e IHC sono due metodi diagnostici basati sul concetto di legame antigene e anticorpo, sebbene la modalità di rilevamento in entrambe le tecniche differisca. IF utilizza il principio della fluorescenza per rilevare l'antigene e IHC utilizza il concetto di coniugazione chimica per rilevare l'antigene. Questa è la differenza tra IF e IHC.
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