Differenza chiave: ibridazione in situ vs immunoistochimica
La diagnostica del cancro e delle malattie infettive è una tendenza popolare in cui vengono utilizzate nuove tecniche di proteomica e genomica allo scopo di identificare tumori o cellule infettive, la sua proliferazione e i siti di sviluppo cellulare e analizzare le basi genetiche della maggior parte delle malattie non trasmissibili. Ciò si tradurrà in un'accurata elaborazione e progettazione dei farmaci e nello sviluppo di terapie personalizzate per le malattie. L'ibridazione in situ (ISH) e l'immunoistochimica (IHC) sono due tecniche così ampiamente utilizzate nella biologia del cancro e la differenza chiave tra l'ibridazione in situ e l'immunochimica risiede nelle molecole utilizzate nella procedura di analisi. In ISH, le sonde di acido nucleico sono utilizzate nell'analisi mentre, in IHC, gli anticorpi monoclonali e policlonali sono usati per le determinazioni diagnostiche.
Che cos'è l'ibridazione in situ (ISH)?
L'ibridazione in situ è una tecnica di ibridazione dell'acido nucleico che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto, nell'intero tessuto o nelle cellule. La tecnica dipende dalla teoria dell'accoppiamento di basi complementari Watson Crick, risultando in ibridi DNA-DNA o ibridi DNA-RNA in grado di rilevare geni mutati o identificare il gene di interesse richiesto. Sequenze di DNA a filamento singolo, sequenze di DNA a doppio filamento, sequenze di RNA a filamento singolo o sequenze di oligonucleotidi sintetici vengono utilizzate come sonde durante la tecnica di ibridazione e queste sonde sono etichettate con un fosforo radioattivo all'estremità 5' per le procedure di identificazione su autoradiografia o etichettate utilizzando coloranti fluorescenti. Sono disponibili diversi tipi di tecniche ISH in base al tipo di sonda utilizzata e al tipo di tecnica di visualizzazione seguita.
Figura 01: Ibridazione in situ fluorescente
Ci sono molte applicazioni dell'ISH, principalmente nella diagnostica molecolare delle malattie infettive per identificare la presenza di agenti patogeni e per confermare l'agente patogeno tramite la diagnostica molecolare. Viene anche utilizzato nei campi della biologia dello sviluppo, del cariotipo e dell'analisi filogenetica e della mappatura fisica dei cromosomi.
Cos'è l'immunoistochimica (IHC)?
Nella tecnica dell'IHC, la principale molecola analizzata è l'antigene. Durante l'IHC, vengono utilizzati anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni in caso di infezione o stato di proliferazione delle cellule maligne. La tecnica si basa sul legame antigene-anticorpo e per questa tecnica vengono utilizzate etichette enzimatiche; una di queste applicazioni è l'ELISA (saggio di immunoassorbimento enzimatico). I marcatori possono anche essere anticorpi marcati fluorescenti o anticorpi marcati radio.
Figura 02: Immunoistochimica
IHC è ampiamente utilizzato per il rilevamento delle cellule tumorali. Le procedure diagnostiche prendono di mira gli antigeni presenti sulle cellule tumorali per identificare e caratterizzare il tumore. La stessa procedura è incorporata per diagnosticare gli agenti infettivi. Gli anticorpi monoclonali e policlonali vengono utilizzati anche per analizzare diversi prodotti genici consentendo la reazione di legame anticorpo-antigene tra la proteina desiderata e l'anticorpo sintetico somministrato.
Quali sono le somiglianze tra l'ibridazione in situ e l'immunoistochimica?
- ISH e IHC sono reazioni altamente specifiche.
- Entrambe le tecniche sono estremamente accurate.
- Entrambe le tecniche possono essere utilizzate nella diagnostica del cancro e delle malattie infettive.
- Queste tecniche vengono eseguite in ambienti sterili in vitro.
- Entrambe sono tecniche rapide che forniscono risultati riproducibili.
- ISH e IHC utilizzano metodi di rilevamento come l'etichettatura radio e tecniche di fluorescenza.
Qual è la differenza tra ibridazione in situ e immunoistochimica?
Ibridazione in situ vs immunoistochimica |
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| ISH è una tecnica di ibridazione dell'acido nucleico che viene eseguita direttamente su una porzione o sezione di tessuto o sull'intero tessuto. | IHC è una tecnica in cui vengono utilizzati anticorpi monoclonali e policlonali per determinare la presenza di antigeni, che sono speciali marcatori proteici posti sulla superficie cellulare. |
| Tipo di biomolecole analizzate | |
| ISH analizza gli acidi nucleici. | IHC analizza proteine-antigeni. |
| Base della reazione biochimica | |
| In questa tecnica si verifica un accoppiamento di basi complementare tra DNA-DNA o DNA-RNA. | Le interazioni antigene-anticorpo sono coinvolte nell'immunoistochimica. |
| Metodi di rilevamento legati agli enzimi | |
| I metodi di rilevamento collegati agli enzimi non possono essere utilizzati in ISH. | I metodi di rilevamento collegati a enzimi possono essere utilizzati in IHC. |
Riepilogo – Ibridazione in situ vs immunoistochimica
La diagnostica molecolare è un metodo rapido e di conferma che può essere utilizzato per identificare una malattia non trasmissibile come il cancro o una malattia trasmissibile come l'HIV o la tubercolosi sulla base dei marcatori molecolari presenti sulle cellule che portano alla manifestazione della malattia. I marcatori molecolari possono essere presenti sotto forma di proteine espresse oa livello genetico in base al quale vengono introdotte diverse nuove tecniche per aumentare l'efficienza e sono meno laboriose, sebbene queste tecniche comportano un costo elevato. Quindi ISH dipende dalla formazione di ibridi DNA-DNA o DNA-RNA e IHC dipende dalle reazioni specifiche tra l'anticorpo e l'antigene. Questa è la differenza tra l'ibridazione in situ.
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