La differenza fondamentale tra immunofluorescenza diretta e indiretta è che l'immunofluorescenza diretta utilizza un singolo anticorpo che agisce contro il bersaglio di interesse mentre l'immunofluorescenza indiretta utilizza due anticorpi per etichettare il bersaglio di interesse.
L'immunofluorescenza o imaging cellulare è una tecnica utilizzata per etichettare un antigene bersaglio specifico con un fluoroforo. Qui, il fluoroforo è un composto chimico fluorescente che può riemettere luce dopo l'eccitazione della luce. Quando un fluoroforo si lega con l'antigene bersaglio, consente il rilevamento della molecola bersaglio nel campione. Per descriverlo ulteriormente, quando un antigene si lega con un anticorpo specifico, può essere coniugato con fluorofori. Pertanto, è facile rilevare la presenza dell'antigene bersaglio nel campione durante l'osservazione al microscopio a fluorescenza.
Inoltre, ci sono due tipi di immunofluorescenza; immunofluorescenza diretta e indiretta. La differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta risiede principalmente nel numero di anticorpi utilizzati e nella coniugazione del fluoroforo. Cioè, nell'immunofluorescenza diretta, il fluoroforo si coniuga direttamente all'anticorpo primario mentre nell'immunofluorescenza indiretta, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo secondario.
Cos'è l'immunofluorescenza diretta?
L'immunofluorescenza utilizza gli anticorpi per rilevare specifici antigeni bersaglio. L'immunofluorescenza diretta è uno dei due tipi di immunofluorescenza. Nell'immunofluorescenza diretta, un singolo anticorpo (anticorpo primario) coinvolge e il fluoroforo si coniuga direttamente con l'anticorpo primario. Dopo aver legato l'anticorpo con l'antigene bersaglio, il fluoroforo emette fluorescenza che può essere rilevata da un microscopio a fluorescenza.
Figura 01: Immunofluorescenza diretta
Tuttavia, l'immunofluorescenza diretta è un metodo costoso poiché gli anticorpi coniugati primari sono costosi rispetto agli anticorpi secondari. Tuttavia, non comporta un passaggio aggiuntivo, quindi una tecnica più breve. Inoltre, i legami non specifici sono ridotti nell'immunofluorescenza diretta. Quindi, la reattività crociata delle specie è bassa. Ma nel rilevamento, la sensibilità dell'immunofluorescenza diretta è debole rispetto all'immunofluorescenza indiretta.
Cos'è l'immunofluorescenza indiretta?
L'immunofluorescenza indiretta è il secondo tipo di immunofluorescenza che coinvolge due tipi di anticorpi come gli anticorpi primari e secondari nell'etichettatura dell'antigene bersaglio. In questo metodo, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo secondario. Quindi, questa tecnica comporta un passaggio aggiuntivo.
Figura 02: Immunofluorescenza
Tuttavia, la sensibilità è elevata in questo metodo poiché diversi fluorofori possono essere coniugati con anticorpi secondari e rende più facile la rilevazione. Inoltre, l'immunofluorescenza indiretta è meno costosa in quanto la coniugazione di anticorpi secondari è meno costosa e più facile. Rispetto all'immunofluorescenza diretta, la reattività crociata delle specie è elevata nel metodo indiretto.
Quali sono le somiglianze tra immunofluorescenza diretta e indiretta?
- Sono due tipi di tecniche di immunofluorescenza.
- Gli anticorpi primari e il fluoroforo sono coinvolti in entrambi i metodi.
- Inoltre, la reazione antigene-anticorpo si verifica in entrambi i metodi.
- Inoltre, sia l'immunofluorescenza diretta che quella indiretta utilizzano un microscopio a fluorescenza per la rilevazione dell'antigene.
Qual è la differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta?
L'immunofluorescenza può essere diretta o indiretta in base alla coniugazione del fluoroforo con gli anticorpi utilizzati. Nell'immunofluorescenza diretta, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo primario, che è il singolo anticorpo coinvolto in questa tecnica. Al contrario, nell'immunofluorescenza indiretta, il fluoroforo si coniuga con l'anticorpo secondario, che è uno dei due tipi di anticorpi coinvolti nella tecnica. Quindi, la principale differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta è il tipo di anticorpo che si coniuga con il fluoroforo.
La seguente infografica fornisce un confronto fianco a fianco della differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta.
Riepilogo – Immunofluorescenza diretta vs indiretta
L'immunofluorescenza è una tecnica utilizzata per rilevare la presenza di antigeni specifici in un campione. Questa tecnica utilizza anticorpi specifici. Pertanto, in questo, gli anticorpi si coniugano con i fluorofori per rilevarli utilizzando un microscopio a fluorescenza. Inoltre, ci sono due tipi di immunofluorescenza, vale a dire, immunofluorescenza diretta e indiretta. L'immunofluorescenza diretta coinvolge un singolo anticorpo e un fluoroforo direttamente coniugato a questo anticorpo. L'immunofluorescenza indiretta coinvolge due anticorpi; primario e secondario e fluoroforo coniugato all'anticorpo secondario. Poiché diversi anticorpi secondari possono legarsi con un anticorpo primario e diversi fluorofori possono coniugarsi con anticorpi secondari, l'immunofluorescenza indiretta è un metodo più sensibile rispetto al metodo diretto. Inoltre, il metodo indiretto è meno costoso del metodo diretto. Quindi, questa è la differenza tra immunofluorescenza diretta e indiretta.
