La differenza fondamentale tra Elisa ed Elispot è che Elisa è un test di immunoassorbimento enzimatico che determina la concentrazione totale delle proteine di segnalazione secrete, mentre Elispot è un test di immunoassorbimento enzimatico che rileva le singole cellule che secernono citochine.
Elisa ed Elispot sono due test di immunoassorbimento enzimatico ampiamente utilizzati in medicina, patologia vegetale, biotecnologia e diverse industrie farmaceutiche. In queste tecniche, un analita proteico viene rilevato da un anticorpo diretto contro di esso. Elisa è il test di immunoassorbimento enzimatico più popolare utilizzato nei laboratori. D' altra parte, Elispot è un test di immunoassorbimento enzimatico che non viene utilizzato al posto di Elisa ma piuttosto utilizzato in aggiunta a Elisa nei laboratori.
Cos'è il test Elisa?
Elisa è un test di immunoassorbimento enzimatico che determina la concentrazione totale delle proteine di segnalazione secrete. È un test di biochimica analitica ampiamente utilizzato che è stato descritto per la prima volta da Engvall e Perlmann nel 1971. Questa tecnica utilizza un tipo di test immunoenzimatico in fase solida per rilevare la presenza di una proteina specifica in un campione liquido utilizzando anticorpi diretti contro questa specifica proteina. Questo test è uno strumento diagnostico comunemente usato in medicina, patologia vegetale e biotecnologia.
Meccanismo del test ELISA
Nella maggior parte del test ELISA, all'inizio una quantità sconosciuta di antigene viene immobilizzata su un supporto solido (piastra da microlitri). Quindi l'anticorpo primario corrispondente viene applicato sulla superficie di supporto solida. Questo anticorpo forma un complesso con l'antigene (complesso antigene-anticorpo). L'anticorpo primario legato all'antigene può essere rilevato da un anticorpo secondario che è legato a un enzima attraverso la bioconiugazione. Nella fase finale del test Elisa viene aggiunta una sostanza contenente il substrato dell'enzima. Se esiste un legame corretto di un anticorpo primario con l'antigene, il substrato produce un cambiamento di colore rilevabile. In definitiva, questo quantifica l'antigene nel campione.
Figura 01: Diversi tipi di Elisa
Inoltre, ci sono diversi approcci ad Elisa, come Elisa diretta ed Elisa indiretta. Attualmente, vari test Elisa vengono utilizzati per rilevare agenti patogeni umani come Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virus dell'epatite B, virus dell'epatite C, E.coli che producono enterotossine, HIV e SARS-CoV-2.
Cos'è il test Elispot?
Elispot è un test di immunoassorbimento enzimatico che rileva le singole cellule che secernono citochine. Cecil Czerkinsky ha descritto per la prima volta ELISpot nel 1983. È un tipo di analisi che si concentra sulla misurazione quantitativa della frequenza della secrezione di citochine per una singola cellula. È anche classificato come una tecnica che utilizza anticorpi per rilevare un analita proteico biologico o chimico. Il test Fluorospot è una variazione del test Elispot, che utilizza la fluorescenza per analizzare più analiti (proteine più secrete).
Meccanismo di test Elispot
In questo meccanismo, gli anticorpi monoclonali specifici per le citochine vengono inizialmente aggiunti ai pozzetti delle piastre da microlitri. Quindi le cellule desiderate osservate vengono aggiunte ai pozzetti. Successivamente, le cellule vengono incubate. Durante l'incubazione cellulare, le cellule possono reagire a qualsiasi stimolo e secernono citochine. Le citochine che sono state secrete dalle cellule incubate si legheranno agli anticorpi poiché le cellule sono circondate da anticorpi monoclonali specifici per le citochine.
Figura 02: Saggio Elispot
Per rilevare questi anticorpi monoclonali specifici per le citochine, nel pozzetto vengono aggiunti anticorpi di rilevamento specifici biotinilati. Gli anticorpi di rilevamento biotinilati specifici catturano gli anticorpi monoclonali specifici per le citochine nei pozzetti. Inoltre, ai pozzetti vengono aggiunti coniugati streptavidina-enzima per legarsi con gli anticorpi di rilevamento. Nella fase finale, ai pozzetti vengono aggiunti substrati specifici. Le reazioni dei coniugati enzimatici e dei substrati producono punti distinti nei pozzetti. Questi punti distinti vengono letti su un lettore ELISpot automatizzato. In definitiva, questo calcolerà ulteriormente la frequenza della secrezione di citochine.
Quali sono le somiglianze tra Elisa ed Elispot?
- Sono entrambi saggi di immunoassorbimento enzimatico.
- Entrambi i test rilevano analiti proteici specifici.
- Questi test utilizzano anticorpi specifici per identificare gli analiti proteici.
- Entrambi i test utilizzano enzimi e substrati.
- Sono usati come strumento diagnostico nei laboratori medici.
Qual è la differenza tra Elisa ed Elispot?
Elisa è un test di immunoassorbimento enzimatico che determina la concentrazione totale delle proteine di segnalazione secrete. D' altra parte, Elispot è un test di immunoassorbimento enzimatico che misura le singole cellule secernenti citochine. Quindi, questa è la differenza chiave tra Elisa ed Elispot. Inoltre, nel test Elisa, l'antigene viene prima immobilizzato sui pozzetti da microlitro. Al contrario, nel test Elispot, l'anticorpo viene prima immobilizzato sui pozzetti dei microlitri. Quindi, questa è un' altra differenza tra Elisa ed Elispot.
L'infografica qui sotto presenta un'analisi dettagliata della differenza tra Elisa ed Elispot in forma tabellare.
Riepilogo – Elisa vs Elispot
Elisa ed Elispot sono due test di immunoassorbimento enzimatico ampiamente utilizzati in medicina, patologia vegetale, biotecnologia e diverse industrie farmaceutiche. Elisa rileva la presenza di un ligando (proteina) in un campione liquido utilizzando anticorpi diretti contro il ligando da misurare. Il test Elispot è un metodo ampiamente utilizzato per monitorare le risposte immunitarie. Rileva le singole cellule che secernono citochine utilizzando anticorpi. È sia una tecnica di dosaggio immunologico che biologica. Quindi, questo è il riassunto della differenza tra Elisa ed Elispot.
