Differenza chiave – ELISA diretto vs indiretto
Un test immunoenzimatico (ELISA), noto anche come test immunoenzimatico, è un test sierologico che rileva gli anticorpi nel sangue. Viene utilizzato come strumento diagnostico per scoprire se il paziente è stato esposto a un particolare tipo di virus o un altro agente infettivo (antigene) e se l'organismo ha prodotto anticorpi contro l'infezione. ELISA può anche identificare le infezioni passate e attuali. Pertanto, l'ELISA viene spesso utilizzato come test di pre-screening dai medici prima di un'analisi approfondita delle malattie. Questo test può essere eseguito in laboratorio prelevando un campione di sangue dal paziente. Esistono due tipi di test ELISA: ELISA diretto e ELISA indiretto. Il differenza fondamentale tra ELISA diretto e indiretto è quello ELISA indiretto è più sensibile e richiede l'aggiunta di un anticorpo secondario mentre l'ELISA diretto è meno sensibile e utilizza solo un anticorpo primario.
Cos'è l'ELISA diretto?
ELISA è un test diagnostico della malattia eseguito per identificare la presenza di particolari antigeni o anticorpi nel sangue. È fatto come un test su piastra. Utilizza anticorpi legati a enzimi facilmente dosabili. La presenza di antigeni nel campione di siero si lega con anticorpi specifici legati agli enzimi. Nella fase finale, viene aggiunto un substrato specifico per reagire con l'enzima. L'enzima converte il substrato in un prodotto colorato o che produce segnali. Il cambiamento di colore nel substrato chimico rivela la presenza di un particolare anticorpo nel campione di siero. Il test ELISA diretto utilizza solo un anticorpo primario legato all'enzima. Dopo essersi legato all'antigene, cambia rapidamente colore, indicando la presenza dell'agente infettivo nel sangue. Tuttavia, l'intensità dei segnali è più debole nell'ELISA diretto poiché gli epitopi sono limitati al legame degli antigeni. Quindi, l'ELISA diretto è meno sensibile rispetto all'ELISA indiretto.
Figura 01: Test ELISA diretto
Cos'è l'ELISA indiretto?
ELISA può essere eseguito utilizzando due tipi di anticorpi, vale a dire; anticorpo primario e anticorpo secondario. Lo strumento ELISA indiretto utilizza entrambi i tipi di anticorpi per amplificare i segnali per una migliore rilevazione. La tecnica ELISA indiretta viene eseguita come segue.
- Le piastre vengono incubate con antigeni e lavate per bloccare il legame non specifico.
- Poi vengono aggiunti e lavati gli anticorpi primari.
- L'anticorpo secondario legato all'enzima viene aggiunto e lavato.
- Un substrato viene aggiunto e lasciato reagire con gli enzimi.
- I segnali vengono rilevati e viene identificata la presenza o l'assenza dell'antigene specifico nel campione.
Nel test ELISA indiretto, diversi anticorpi secondari possono legarsi a un singolo anticorpo primario. Gli anticorpi secondari sono collegati con enzimi facilmente dosabili. Pertanto, un legame può creare un segnale forte a causa di più interazioni. Quindi, l'ELISA indiretto è più sensibile dell'ELISA diretto. Tuttavia, l'ELISA indiretto può emettere segnali non specifici a causa delle reazioni incrociate degli anticorpi secondari.
Figura 02: Test ELISA indiretto
Qual è la differenza tra ELISA diretto e indiretto?
ELISA diretto vs indiretto |
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| L'ELISA diretto è meno sensibile rispetto all'ELISA indiretto. | L'ELISA indiretto è più sensibile. |
| Tempo impiegato | |
| Il test ELISA diretto è un processo rapido. | L'ELISA indiretto richiede tempo. |
| Uso di anticorpi | |
| Nell'ELISA diretto viene utilizzato un solo tipo di anticorpi (anticorpi primari). | Gli anticorpi primari e secondari vengono utilizzati per l'ELISA indiretto. |
| Collegamento con enzimi | |
| Gli anticorpi primari sono legati agli enzimi. | Gli anticorpi secondari sono legati agli enzimi. |
| Reattività crociata dei secondi anticorpi | |
| L'ELISA diretto elimina la reattività crociata dei secondi anticorpi. | L'ELISA indiretto è influenzato dalla reattività crociata dei secondi anticorpi. |
| Segnali | |
| I segnali sono deboli rispetto all'ELISA indiretto. | I segnali vengono amplificati in ELISA indiretto. Quindi, è facile da rilevare. |
Riepilogo – ELISA diretto vs indiretto
ELISA è una tecnica biochimica utilizzata principalmente in immunologia per rilevare la presenza di un anticorpo o di un antigene in un campione di sangue di un paziente. Può essere eseguito tramite due processi noti come ELISA diretto o indiretto. Il test ELISA diretto utilizza solo anticorpi primari per rilevare l'antigene mentre l'ELISA indiretto utilizza anticorpi primari e secondari. Nell'ELISA diretto, gli anticorpi primari sono etichettati mentre nell'ELISA indiretto sono etichettati gli anticorpi secondari. Questa è la differenza tra ELISA diretto e indiretto.
