La differenza fondamentale tra ELISA competitivo e non competitivo è che l'ELISA competitivo utilizza un antigene di inibizione mentre l'ELISA non competitivo non utilizza un antigene di inibizione per il test.
Il saggio ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) è un saggio immunologico che rileva vari bersagli come anticorpi, antigeni, proteine e glicoproteine. È un metodo rapido e semplice da eseguire. Quindi, è più spesso utilizzato per scopi di ricerca e diagnostici. L'ELISA prevede l'uso di enzimi e il legame specifico di anticorpi e antigeni. In base a come si verificano le reazioni, ci sono quattro tipi di ELISA: ELISA diretto, ELISA indiretto, ELISA sandwich e ELISA di inibizione. L'ELISA diretto, indiretto e sandwich sono tipi di ELISA non competitivo mentre l'ELISA di inibizione è un tipo di ELISA completo. Lo scopo principale di questo articolo è discutere la differenza tra ELISA competitivo e non competitivo.
Cos'è l'ELISA competitivo?
L'ELISA competitivo misura la concentrazione dell'antigene in un campione attraverso il rilevamento dell'interferenza del segnale. Qui, il test utilizza un antigene inibitore. Quindi, è un tipo di ELISA di inibizione. Durante questa procedura, gli antigeni presenti nel campione competono con l'antigene di riferimento selezionato per legarsi a una quantità specifica di anticorpo marcato. Inoltre, questa procedura inizia con l'incubazione del campione, con la quantità in eccesso di anticorpo marcato. Inoltre, l'antigene di riferimento deve essere pre-rivestito su una piastra a pozzetti multipli. Quindi la miscela del campione deve essere aggiunta alla piastra del test che contiene l'antigene di riferimento. Gli anticorpi liberi si legheranno all'antigene di riferimento a seconda della quantità di antigene nel campione. Quindi, se è presente più antigene del campione, verrà rilevato meno antigene di riferimento. Pertanto, crea un segnale più debole.
Figura 01: ELISA
Al contrario, quando il campione contiene meno quantità di antigene, sempre più antigene di riferimento occuperà gli anticorpi e darà un segnale forte. Poiché l'ELISA competitivo fornisce un segnale più forte quando il campione contiene una bassa quantità di antigeni, l'ELISA competitivo è un test molto sensibile, anche per campioni con un numero ridotto di antigeni.
In alcuni kit ELISA della concorrenza, viene utilizzato un antigene marcato invece di un anticorpo marcato. Qui, l'antigene marcato e l'antigene campione si contenderanno il legame con l'anticorpo primario. Allo stesso modo, quando la quantità di antigene nel campione è bassa, la quantità di antigene marcato che si lega agli anticorpi sarà maggiore e creerà un segnale più forte.
Cos'è l'ELISA non competitivo?
Tra i quattro tipi di ELISA, tre tipi sono ELISA non competitivo. Sono ELISA diretto, ELISA indiretto e ELISA sandwich. Tutti e tre i formati funzionano secondo il principio comune di ELISA con lievi differenze nelle loro metodologie.
Direct ELISA utilizza un anticorpo primario marcato con un enzima. Quindi, non richiede un anticorpo secondario. Pertanto, l'ELISA diretto è più veloce di altri tipi di ELISA. L'anticorpo primario si legherà direttamente all'antigene bersaglio immobilizzato presente nella piastra. Quindi, avrà luogo la reazione enzima-substrato, producendo un segnale visibile.
Figura 02: Sandwich ELISA
A differenza dell'ELISA diretto, l'ELISA indiretto utilizza un anticorpo primario non marcato e un anticorpo secondario marcato con enzima. Una volta che l'anticorpo primario si lega all'antigene immobilizzato, l'anticorpo secondario si lega all'anticorpo primario. L'enzima nell'anticorpo secondario reagirà con l'antigene e produrrà un segnale visibile. L'ELISA sandwich è diverso dall'ELISA diretto e da quello indiretto. Qui, l'anticorpo viene immobilizzato sulla parete della piastra del test.
Quali sono le somiglianze tra ELISA competitivo e non competitivo?
- L'ELISA competitivo e non competitivo sono due tipi di tecniche di test immunoassorbenti.
- Sono tecniche altamente flessibili e sensibili.
- Inoltre, sia il test ELISA competitivo che quello non competitivo sono saggi immunoenzimatici.
- Inoltre, entrambi i metodi generano un segnale dovuto a una reazione enzima-substrato.
Qual è la differenza tra ELISA competitivo e non competitivo?
L'ELISA competitivo è un tipo di ELISA che si basa sul completamento tra l'antigene dell'analita e l'antigene marcato per una quantità limitata di anticorpi specifici. D' altra parte, non esiste tale competizione tra l'antigene di interesse e l'antigene di riferimento nell'ELISA non competitivo. Pertanto, questa è la differenza chiave tra ELISA competitivo e non competitivo. Allo stesso modo, l'ELISA competitivo è un ELISA di inibizione mentre l'ELISA non competitivo non è un ELISA di inibizione. Quindi, questa è anche una differenza tra ELISA competitivo e non competitivo.
Inoltre, l'ELISA competitivo è più adatto per misurare una bassa quantità di antigene di interesse. È un metodo sensibile. D' altra parte, l'ELISA non competitivo non dipende dal numero di antigeni presenti in un campione. Pertanto, questa è anche una differenza tra ELISA competitivo e non competitivo.
Qui sotto l'infografica spiega la differenza tra ELISA competitivo e non competitivo in confronto.
Riepilogo – ELISA competitivo vs non competitivo
I test ELISA competitivi e non competitivi sono i due principali tipi di test ELISA o test di immunoassorbimento enzimatico. Nel riassumere la differenza tra ELISA competitivo e non competitivo, l'ELISA competitivo si basa sulla competizione tra antigene di interesse e antigene di riferimento verso la quantità limitata di anticorpi. Pertanto, l'ELISA competitivo è anche chiamato ELISA di inibizione. D' altra parte, l'ELISA non competitivo non si basa sulla competizione tra antigeni bersaglio e antigeni di riferimento. Utilizza un eccesso di anticorpo specifico marcato verso l'analita di interesse. Pertanto, questa è la differenza chiave tra ELISA competitivo e non competitivo. ELISA diretto, ELISA indiretto ed ELISA sandwich sono i tre tipi principali di ELISA non competitivo.
