Differenza chiave: colorazione di Gram vs acido resistente
I batteri sono microrganismi molto piccoli. Sono trasparenti e il loro rilevamento è difficile in condizioni di vita e non colorate. Pertanto, vengono sviluppati vari metodi di colorazione per facilitare il rilevamento batterico. Esistono tre tipi principali di tecniche di colorazione: colorazione semplice, colorazione differenziale e colorazione strutturale. La colorazione differenziale è una tecnica che utilizza più di una colorazione per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e la colorazione acido-resistente sono più comunemente conosciute come colorazioni differenziali. La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi noti come batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi. La colorazione acido-resistente è una colorazione differenziale utilizzata per identificare organismi acido-resistenti come Mycobacterium da organismi non acido-resistenti. Questa è la differenza fondamentale tra la colorazione di Gram e la colorazione Acid Fast.
Cos'è la colorazione di Gram?
La colorazione di Gram è un'importante tecnica di colorazione differenziale utilizzata per l'identificazione batterica in microbiologia. Questa tecnica è stata introdotta dal batteriologo danese Hans Christian Gram nel 1884. La colorazione Gram classifica i batteri in due gruppi principali denominati gram positivi e gram negativi, che sono molto importanti nella classificazione e identificazione batterica. I microbiologi eseguono la colorazione del grammo come passaggio iniziale nella caratterizzazione batterica durante i loro studi.
I batteri sono raggruppati in base alle differenze nella loro parete cellulare. I batteri gram-positivi sono composti da uno spesso strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare mentre i batteri gram-negativi sono composti da un sottile strato di peptidoglicano nella loro parete cellulare. Il risultato della colorazione del grammo sarà basato sulla differenza nello spessore dello strato di peptidoglicano della parete cellulare.
La colorazione di Gram viene eseguita utilizzando quattro diversi reagenti, vale a dire; colorante primario, mordente, decolorante e controcolorante. Il cristalvioletto e la safranina sono usati rispettivamente come coloranti primari e di contrasto, mentre grammi di iodio e alcol al 95% sono usati rispettivamente come mordente e decolorante. I passaggi di base della colorazione dei grammi sono i seguenti;
- Uno striscio batterico viene preparato su un vetrino pulito, fissato a caldo e raffreddato.
- Lo striscio viene inondato di violetto cristallino per 1 – 2 minuti.
- Lo striscio viene risciacquato con acqua del rubinetto a flusso lento per rimuovere le macchie in eccesso.
- Grams iodio viene applicato sullo striscio per 1 minuto.
- Lo striscio viene risciacquato con acqua del rubinetto che scorre lentamente
- Lo striscio viene lavato con alcol al 95% per 2-5 secondi e risciacquato con acqua del rubinetto a flusso lento.
- Lo striscio viene macchiato con safranina per 1 minuto
- Lo striscio viene risciacquato con acqua di rubinetto che scorre lentamente, asciugato e osservato al microscopio.
Alla fine della colorazione gram, i batteri gram negativi saranno osservati in colore rosa mentre i batteri gram positivi saranno osservati in colore viola.
Figura 01: Batteri Gram negativi e Gram positivi
Il risultato della colorazione di Gram è deciso dallo spessore dello strato di peptidoglicano nella parete cellulare. Durante la fase di decolorazione, il colorante primario e il mordente vengono facilmente rimossi dai batteri gram negativi e diventano incolori poiché hanno un sottile strato di peptidoglicano. La colorazione primaria viene trattenuta nei batteri gram-positivi poiché hanno uno spesso strato di peptidoglicano. La controcolorazione non sarà efficace per i batteri gram-positivi a causa della ritenzione della colorazione primaria. Pertanto, i batteri gram-positivi saranno visibili nel colore della macchia primaria, ovvero il colore viola. La contromacchia macchierà i batteri gram-negativi, che saranno visibili nel colore pick, che è il colore della safranina. Quindi, è facile classificare i batteri in due gruppi in base alla colorazione di grammo ed è prezioso per la differenziazione e l'identificazione batterica.
Cos'è l'acido resistente?
La solidità agli acidi è una proprietà fisica di alcuni batteri, in particolare la loro resistenza alla decolorazione da parte degli acidi durante le procedure di colorazione. Una volta colorati, questi organismi resistono alle procedure di decolorazione a base di acido diluito e/o etanolo comuni in molti protocolli di colorazione. Pertanto, a quegli organismi viene dato il nome "acido resistente". Questa proprietà è dimostrata dall'avere un alto livello di materiale ceroso (acidi micolici) nelle loro pareti cellulari. Questo test è fondamentale per l'identificazione del Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: Micobatteri acido-resistenti
Questa colorazione acido-resistente è stata sviluppata da Paul Ehrlich nel 1882. La tecnica acido-resistente di Ehrlich è stata modificata da Ziehl-Neelsen e ora è usata più frequentemente. La procedura di colorazione acida rapida prevede tre diversi reagenti. Il carbol fuschin è usato come colorante primario. L'alcol acido è usato come agente decolorante. Il blu di metilene è usato come contromacchia. La procedura di colorazione viene eseguita come segue.
- La colorazione primaria (carbolfuchsin) viene applicata al campione fissato sul vetrino (tutte le cellule saranno colorate in rosso).
- Il vetrino viene riscaldato mediante cottura a vapore per 5 minuti, che guida correttamente le macchie nelle cellule.
- Poi viene aggiunta la soluzione decolorante (questo rimuove il colorante rosso da tutte le cellule tranne i batteri acido resistenti).
- Il blu di metilene viene aggiunto come controcolorante (colora tutte le cellule batteriche decolorate).
- I batteri resistenti agli acidi rimangono rossi mentre i batteri resistenti agli acidi si colorano di blu.
Quali sono le somiglianze tra colorazione di Gram e acido resistente?
- Gram stain e Acid fast sono due tecniche di colorazione differenziale.
- Entrambe le tecniche classificano i batteri in due gruppi.
- Entrambe le tecniche utilizzano due coloranti e una decolorante.
Qual è la differenza tra colorazione di Gram e acido resistente?
Gram Stain vs Acid Fast |
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| La colorazione di Gram è una tecnica di colorazione differenziale, che separa i batteri in due gruppi di batteri Gram-positivi e batteri Gram-negativi. | Il colorante acido veloce è un colorante differenziale utilizzato per identificare gli organismi acido-resistenti da quelli non acido-resistenti. |
| Macchia primaria | |
| Crystal Violet è la colorazione primaria comunemente usata nella colorazione dei gram. | Carbol fuchsin è il colorante principale utilizzato in acido resistente. |
| Agente decolorante | |
| L'alcol al 95% viene utilizzato come agente decolorante nelle macchie di grammo. | L'alcol acido viene utilizzato come agente decolorante in acido resistente. |
| Contatore macchia | |
| Il colorante di Gram usa la safranina come controcolorante. | Il colorante acido rapido utilizza il blu di metilene come controcolorante. |
| Osservazione | |
| I batteri gram-negativi sono osservati nel colore del plettro e i batteri gram-positivi sono osservati nel colore viola. | I batteri resistenti agli acidi sono osservati in colore rosso e i batteri resistenti agli acidi sono osservati in colore blu. |
Riepilogo – Colorazione di Gram vs Acid Fast
La visualizzazione di microrganismi in stato di vita è difficile. Pertanto, le macchie biologiche e le procedure di colorazione sono ampiamente utilizzate per studiarne le proprietà. La colorazione differenziale è un tipo di tecnica di colorazione utilizzata per differenziare i batteri. La colorazione di Gram e la colorazione acido-resistente sono due tecniche di colorazione differenziale. La colorazione Gram differenzia i batteri gram-negativi e gram-positivi in base allo spessore delle loro pareti cellulari. La colorazione acido-resistente differenzia i batteri acido-resistenti dai batteri non acido-resistenti in base al contenuto di acido micolico nella parete cellulare. Questa è la differenza tra acido resistente e colorante di grammo.
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