Differenza chiave: elettroforesi su gel orizzontale e verticale
L'elettroforesi su gel è una tecnica di laboratorio utilizzata in genetica per separare miscele contenenti DNA, RNA e altre proteine in base alla rispettiva carica e dimensione molecolare. Il DNA, l'RNA o le proteine che devono essere separati in questo metodo vengono fatti passare attraverso un gel che contiene piccoli pori. Le molecole sono guidate attraverso il gel da un campo elettrico. Le molecole passano attraverso i pori del gel e la velocità del movimento è inversamente proporzionale alle rispettive lunghezze. Pertanto, le molecole con dimensioni molecolari inferiori si muoveranno più velocemente delle molecole con un peso molecolare più elevato. Il campo elettrico è generato dalla differenza di carica alle due estremità del gel. Un'estremità contiene una carica positiva e l' altra estremità contiene una carica negativa. Poiché le molecole di DNA e RNA sono caricate negativamente, saranno attratte verso l'estremità caricata positivamente del gel. L'elettroforesi su gel può essere di due metodi diversi: elettroforesi su gel orizzontale ed elettroforesi su gel verticale. Nell'elettroforesi su gel orizzontale, il gel è presente con orientamento orizzontale ed è immerso in un tampone a scorrimento continuo che è presente all'interno della scatola del gel stesso. Nell'elettroforesi su gel verticale, il sistema tampone è orientato verticalmente ed è discontinuo con due camere presenti in alto e in basso rispettivamente con un catodo e un anodo. Questa è la differenza fondamentale tra l'elettroforesi su gel orizzontale e verticale.
Cos'è l'elettroforesi su gel orizzontale?
L'elettroforesi su gel orizzontale utilizza la teoria di base per la separazione di DNA, RNA o molecole proteiche in base alla loro rispettiva dimensione molecolare e carica. In questa tecnica, il gel è presente con orientamento orizzontale ed è immerso in un tampone che è continuo. Il gel di agarosio viene utilizzato per separare la scatola del gel in due scomparti. Un'estremità della scatola del gel contiene un anodo mentre l' altra estremità contiene un catodo. Quando viene applicata una corrente, il buffer utilizzato in questa tecnica consente la creazione di un gradiente di carica. Quando viene applicata la carica, il gel tende a riscaldarsi. Il tampone funge anche da liquido di raffreddamento, mantenendo la temperatura a livelli ottimali. Il ricircolo del tampone di corsa impedisce la formazione di un gradiente di pH. Un sistema tampone discontinuo non può essere utilizzato nell'elettroforesi su gel orizzontale poiché i due compartimenti del sistema gel vengono collegati con il tampone in esecuzione. L'acrilammide viene utilizzata durante l'elettroforesi su gel per separare le miscele proteiche.
Figura 01: Elettroforesi su gel orizzontale
Nell'elettroforesi su gel orizzontale, l'acrilammide non può essere utilizzata poiché la scatola del gel è esposta all'ossigeno. A causa della presenza di ossigeno, la polimerizzazione dell'acrilammide è inibita e ciò interferisce con la formazione del gel. L'elettroforesi su gel orizzontale è un metodo semplice che viene utilizzato nella separazione di DNA e RNA.
Cos'è l'elettroforesi su gel verticale?
La tecnica di elettroforesi su gel verticale funziona secondo la teoria primaria dell'elettroforesi su gel, ma è considerata più complessa del metodo di elettroforesi su gel orizzontale. Questa tecnica utilizza un buffer discontinuo. Un catodo si trova nella camera superiore e l'anodo si trova nella camera inferiore. Gli elettrodi presenti in ogni vano forniscono il campo elettrico richiesto. Un sottile strato di gel viene versato tra le due lastre di vetro montate. Pertanto, la parte superiore del gel viene sommersa nella camera superiore e la parte inferiore del gel viene sommersa nella camera in basso. Una volta applicata la corrente, una piccola porzione del tampone si sposta nella camera inferiore dalla camera superiore attraverso il gel. La corrente applicata in questa tecnica è di unità minuti.
Figura 02: Elettroforesi su gel verticale
Nell'elettroforesi su gel verticale, il tampone scorre solo attraverso il gel. Ciò consente un controllo accurato del gradiente di tensione durante la fase di separazione. Il gel di acrilammide può essere utilizzato poiché i compartimenti non sono esposti all'ossigeno atmosferico. A causa della dimensione dei pori più piccola del gel di acrilammide, è possibile ottenere una separazione precisa con una risoluzione più elevata.
Quali sono le somiglianze tra elettroforesi su gel orizzontale e verticale?
- Entrambi i sistemi funzionano secondo la teoria di base dell'elettroforesi su gel.
- Anodo e catodo sono usati per fornire il campo elettrico richiesto in entrambi i sistemi.
Qual è la differenza tra elettroforesi su gel orizzontale e verticale?
Elettroforesi su gel orizzontale e verticale |
|
| L'elettroforesi su gel orizzontale è una tecnica di elettroforesi su gel in cui il gel è presente con orientamento orizzontale. | L'elettroforesi su gel verticale è una tecnica di elettroforesi su gel in cui il gel viene orientato verticalmente. |
| Buffer | |
| L'elettroforesi su gel orizzontale consiste in un tampone continuo. | Il buffer di corsa è discontinuo nell'elettroforesi su gel verticale. |
| Uso di acrilammide | |
| L'acrilammide non può essere utilizzata per l'elettroforesi su gel orizzontale poiché la scatola del gel è esposta all'ossigeno atmosferico. | Poiché il gel non è esposto all'ossigeno atmosferico a causa di due camere separate, l'acrilammide potrebbe essere utilizzata per l'elettroforesi su gel verticale. |
| Funzione | |
| L'elettroforesi su gel orizzontale è più spesso utilizzata per la separazione di miscele di DNA e RNA ma non di proteine. | L'elettroforesi su gel verticale viene utilizzata per separare miscele di proteine. |
Riepilogo – Elettroforesi su gel orizzontale vs verticale
L'elettroforesi su gel è una tecnica di laboratorio ampiamente utilizzata nella separazione di miscele contenenti molecole di DNA, RNA e proteine. Esistono due metodi di elettroforesi su gel: elettroforesi su gel orizzontale e verticale. Nell'elettroforesi su gel orizzontale, il buffer di corsa è continuo mentre nell'elettroforesi su gel verticale, è discontinua. Questa è la differenza tra elettroforesi su gel orizzontale e verticale. Entrambi i sistemi funzionano secondo il principio comune dell'elettroforesi su gel.
Scarica la versione PDF dell'elettroforesi su gel orizzontale e verticale
Puoi scaricare la versione PDF di questo articolo e usarla per scopi offline come da nota di citazione. Si prega di scaricare la versione PDF qui Differenza tra elettroforesi su gel orizzontale e verticale.
