La differenza fondamentale tra l'elettroforesi su gel di agarosio e quella su gel di poliacrilammide è che l'elettroforesi su gel di agarosio utilizza gel di agarosio versati orizzontalmente per separare frammenti di DNA relativamente più grandi, mentre l'elettroforesi su gel di poliacrilammide utilizza gel di poliacrilammide versati verticalmente per separare frammenti di acido nucleico più corti.
L'elettroforesi è un tipo di tecnica che utilizza un campo elettrico applicato attraverso una matrice di gel per separare biomolecole come DNA, RNA e proteine. Questa separazione di biomolecole come DNA, RNA e proteine attraverso l'elettroforesi si basa sulla carica e sulle dimensioni. I campioni vengono caricati nei pozzetti del gel. Successivamente, il campo elettrico viene applicato attraverso il gel. Il campo fa sì che le molecole caricate negativamente si muovano verso l'elettrodo positivo. La matrice di gel agisce come un setaccio molecolare attraverso il quale le molecole più piccole passano o viaggiano rapidamente mentre le molecole più grandi si muovono lentamente. Ciò consente la separazione delle molecole in base alla carica e alle dimensioni. Pertanto, l'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide sono due tipi di tecniche di elettroforesi su gel che aiutano principalmente a separare le molecole in base alla loro dimensione e carica.
Cos'è l'elettroforesi su gel di agarosio?
L'elettroforesi su gel di agarosio è una tecnica che utilizza gel di agarosio per separare biomolecole come DNA e RNA. È una tecnica utilizzata per separare gli acidi nucleici principalmente per dimensione. Il principale composto chiamato agarosio utilizzato in questa tecnica è un polisaccaride. Proviene dalle alghe. L'agarosio può essere sciolto in tampone bollente e poi può essere versato in un vassoio che viene mantenuto orizzontalmente. Nella teglia si solidifica quando si raffredda formando una lastra. I gel di agarosio vengono versati con un pettine in posizione per creare pozzi in cui vengono caricati acidi nucleici come DNA o RNA una volta che il gel si è solidificato.
Figura 01: Elettroforesi su gel di agarosio
Il gel viene successivamente immerso in un tampone appropriato e viene applicata una corrente attraverso il gel. Il DNA ha una carica negativa uniforme che è indipendente dalla composizione della sequenza della molecola. Pertanto, le molecole di DNA migreranno dal catodo (-) verso l'anodo (+). La velocità di migrazione dipende direttamente dalla dimensione della molecola. Le macromolecole più grandi hanno difficoltà a navigare attraverso il gel. D' altra parte, le macromolecole più piccole scivolano attraverso il gel rapidamente e abbastanza facilmente.
Cos'è l'elettroforesi su gel di poliacrilammide?
L'elettroforesi su gel di poliacrilammide (PAGE) è una tecnica che utilizza gel di poliacrilammide per separare le biomolecole. È una tecnica ampiamente utilizzata per separare le macromolecole biologiche, solitamente proteine e acidi nucleici, in base alla loro mobilità elettroforetica. L'idratazione dell'acrilonitrile provoca la formazione di molecole di acrilammide da parte della nitrile idratasi. L'acrilammide è solubile in acqua e, con l'aggiunta di iniziatori di radicali liberi, l'acrilammide polimerizza, determinando la formazione di gel di poliacrilammide. Normalmente, l'aumento delle concentrazioni di acrilammide provoca una diminuzione della dimensione dei pori nel gel. I gel di poliacrilammide vengono versati verticalmente, a differenza dei gel di agarosio.
Figura 02: Elettroforesi su gel di poliacrilammide
Nell'elettroforesi su gel di poliacrilammide, le molecole possono funzionare nel loro stato nativo, preservando la struttura di ordine superiore delle molecole. Questo metodo è chiamato PAGINA nativa. In alternativa, si può anche aggiungere un denaturante chimico per rimuovere la struttura di ordine superiore e trasformare la molecola in una molecola non strutturata la cui mobilità dipende solo dalla sua lunghezza. Questo tipo è chiamato SDS-PAGE.
Quali sono le somiglianze tra l'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide?
- L'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide sono due tipi di tecniche di elettroforesi su gel.
- In effetti, sono tecniche di biologia molecolare.
- Entrambe le tecniche vengono utilizzate per rilevare macromolecole biologiche come DNA e proteine.
- Queste tecniche sono eseguite da tecnici o ricercatori qualificati.
- In entrambe le tecniche, la separazione delle macromolecole si basa sulla carica e sulla dimensione.
- Entrambe le tecniche consentono la separazione di acidi nucleici come DNA e RNA.
Qual è la differenza tra l'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide?
L'elettroforesi su gel di agarosio è una tecnica che utilizza gel di agarosio versati orizzontalmente per separare le biomolecole, mentre l'elettroforesi su gel di poliacrilammide è una tecnica che utilizza gel di poliacrilammide versati verticalmente per separare le biomolecole. Questa è la differenza chiave tra l'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide. Inoltre, l'elettroforesi su gel di agarosio viene utilizzata per la separazione di DNA e RNA, mentre l'elettroforesi su gel di poliacrilammide viene utilizzata per la separazione di acidi nucleici come DNA, RNA o proteine.
La tabella seguente riassume la differenza tra l'elettroforesi su gel di agarosio e quella su gel di poliacrilammide.
Riepilogo – Elettroforesi su gel di agarosio vs poliacrilammide
L'elettroforesi su gel di agarosio e poliacrilammide sono due tipi di tecniche di elettroforesi su gel utilizzate nei laboratori di biologia molecolare. L'elettroforesi su gel di agarosio utilizza un gel di agarosio per separare le biomolecole. L'agarosio generalmente non è tossico per l'uomo, mentre il poliacrilammide è tossico per l'uomo. Inoltre, l'elettroforesi su gel di agarosio mostra una bassa risoluzione mentre l'elettroforesi su gel di poliacrilammide mostra una risoluzione maggiore. L'elettroforesi su gel di poliacrilammide utilizza un gel di poliacrilammide per separare le biomolecole. Questo riassume la differenza tra agarosio ed elettroforesi su gel di poliacrilammide
