La differenza fondamentale tra sonde radioattive e non radioattive è che le sonde radioattive sono sequenze di DNA o RNA a filamento singolo etichettate con isotopi radioattivi mentre le sonde non radioattive sono sequenze di DNA o RNA a filamento singolo etichettate con un tag chimico o un tag fluorescente.
L'ibridazione dell'acido nucleico è una tecnica importante nella biologia molecolare, specialmente nella diagnosi microbica. Aiuta a identificare o rilevare una particolare sequenza di acido nucleico. In questa tecnica, gli acidi nucleici vengono fissati su una superficie solida e ibridati con una sonda. Una sonda è un frammento di DNA o RNA complementare a una sequenza di interesse. Se la sequenza target è presente nel campione, la sonda si ibriderà con essa e la renderà rilevabile. Esistono due tipi di sonde come sonde radioattive e non radioattive. Pertanto, possiamo contrassegnare le sonde con un tag radioattivo o un tag fluorescente.
Cosa sono le sonde radioattive?
Le sonde radioattive sono frammenti di DNA o RNA a filamento singolo con un tag radioattivo. I radioisotopi sono usati nella preparazione di sonde radioattive. I radioisotopi 32P, 33P e 35S sono comunemente usati nell'etichettatura delle sonde. Inoltre, i radioisotopi 3H e 1251 sono utilizzati anche in misura minore nell'etichettatura delle sonde. Ma sono usati per applicazioni specifiche. Tra i diversi radioisotopi, 32P è l'isotopo più comunemente usato nell'etichettatura delle sonde radioattive.
Le sonde radioattive forniscono un grado più elevato di affidabilità e specificità. Pertanto, forniscono la massima sensibilità e consentono una quantificazione accurata delle sequenze target. Tuttavia, ci sono diversi svantaggi associati alle sonde radioattive. Hanno un'emivita breve. Inoltre, sono pericolosi e la produzione, l'uso e lo sm altimento sono problematici durante la manipolazione. Inoltre, la preparazione della sonda radioattiva è un processo costoso. Pertanto, a causa dei problemi di sicurezza e dei costi, oggigiorno le sonde radioattive non vengono utilizzate come sonde non radioattive.
Cosa sono le sonde non radioattive?
Le sonde non radioattive sono il secondo tipo di sonde etichettate chimicamente. La digossigenina è una sonda non radioattiva, che è un marcatore a base di anticorpi. Le sonde alla digossigenina sono specifiche e sensibili. La biotina è un' altra etichetta utilizzata nella preparazione di sonde non radioattive. I sistemi di rilevamento di biotina/streptavidina e digossigenina/anticorpi sono le sonde non radioattive più comunemente utilizzate nell'ibridazione. Inoltre, il sistema della perossidasi di rafano è un altro sistema di sonda non radioattivo. Una volta che queste sonde non radioattive sono state ibridate con le sequenze target, possono essere rilevate tramite autoradiografia o altre tecniche di imaging.
Figura 01: Ibridazione con sonde non radioattive
Le sonde non radioattive vengono utilizzate più spesso nell'ibridazione degli acidi nucleici rispetto alle sonde radioattive. Questo perché le sonde non radioattive non sono associate a materiali pericolosi. Inoltre, i metodi di rilevamento non radioattivi richiedono tempi di esposizione più brevi per rilevare il segnale di ibridazione. Tuttavia, i passaggi coinvolti nell'ibridazione del DNA con sonde non radioattive sono generalmente noiosi e richiedono tempo. Inoltre, le soluzioni disponibili in commercio sono costose.
Quali sono le somiglianze tra le sonde radioattive e non radioattive?
- Le sonde radioattive e non radioattive sono due tipi di sonde utilizzate nell'ibridazione dell'acido nucleico.
- Facilitano il rilevamento delle sequenze target nel campione.
- Entrambi i tipi di sonde sono ugualmente sensibili e specifici.
Qual è la differenza tra sonde radioattive e non radioattive?
Le sonde radioattive sono le sequenze di DNA o RNA a filamento singolo etichettate con isotopi radioattivi, mentre le sonde non radioattive sono le sequenze di DNA o RNA a filamento singolo etichettate con un tag chimico. Quindi, questa è la differenza chiave tra sonde radioattive e non radioattive. Inoltre, gli isotopi radioattivi sono pericolosi. Quindi, le sonde radioattive sono considerevolmente pericolose, mentre le sonde non radioattive non sono pericolose.
Inoltre, un' altra differenza tra le sonde radioattive e non radioattive sono i loro svantaggi. Le brevi emivite ei rischi associati alla loro produzione, uso e sm altimento sono gli svantaggi dell'utilizzo di sonde radioattive. D' altra parte, i passaggi coinvolti nell'ibridazione del DNA con sonde non radioattive sono solitamente noiosi e richiedono tempo.
Qui sotto l'infografica mostra più confronti relativi alla differenza tra sonde radioattive e non radioattive.
Riepilogo – Sonde radioattive e non radioattive
Una sonda è un frammento di DNA o RNA che contiene una sequenza nucleotidica complementare alla sequenza di interesse. Per rilevare la sequenza target, le sonde possono essere etichettate in modo radioattivo, fluorescente o chimicamente. Le sonde si legano con sequenze complementari nel campione. Le sonde radioattive sono etichettate con isotopi radioattivi mentre le sonde non radioattive sono etichettate con biotina, digossigenina o perossidasi di rafano. Quindi, questa è la differenza chiave tra sonde radioattive e non radioattive.
