La differenza chiave tra filtrazione su gel e cromatografia di affinità è che la cromatografia su gel di filtrazione dipende dalle differenze di peso molecolare o dimensione del campione di analita, mentre la cromatografia di affinità dipende dall'affinità di un analita con un ligando immobilizzato.
Il termine cromatografia in chimica analitica si riferisce al processo di separazione dei componenti in una miscela utilizzando tecniche diverse. La cromatografia è un nome collettivo che rappresenta un numero diverso di metodi diversi per la separazione.
Cos'è la cromatografia a filtrazione su gel?
La cromatografia con filtrazione su gel è una tecnica analitica in cui la separazione dei componenti dipende dalla differenza di peso molecolare o dimensione. Questa tecnica è anche nota come cromatografia ad esclusione dimensionale o cromatografia a setaccio molecolare. La tecnica di separazione in questo processo dipende dalla diversa capacità delle molecole nel campione di entrare nei pori del mezzo di filtrazione su gel.
Nella tecnica di filtrazione su gel, la fase stazionaria contiene perle di materiale spugnoso idratato con pori di dimensioni molecolari contenenti una gamma ristretta di dimensioni. Se passiamo una soluzione acquosa costituita da molecole di varie dimensioni attraverso una colonna contenente questi "setacci molecolari", le molecole che sono più grandi dei pori del mezzo di filtrazione si muovono rapidamente attraverso la colonna. Al contrario, le molecole più piccole entrano nei pori del gel e tendono a muoversi lentamente attraverso la colonna. Le molecole eluiscono dalla colonna in ordine decrescente di dimensione molecolare. Qui, il limite di esclusione del gel è la massa molecolare delle molecole più piccole incapaci di penetrare nei pori di un determinato gel.
Esistono diversi tipi di tecniche di filtrazione su gel, come il metodo di filtrazione indiretta su gel, la filtrazione su gel allo stato stazionario, la dialisi con perle di gel, ecc. La cromatografia con filtrazione indiretta su gel è utile nella determinazione degli ormoni tiroidei liberi. La cromatografia con filtrazione su gel allo stato stazionario è una tecnica indiretta utile principalmente per la misurazione di steroidi liberi come cortisolo, testosterone, ecc. La dialisi con perline di gel, d' altra parte, è una modifica della filtrazione su gel allo stato stazionario che è relativamente più semplice.
Cos'è la cromatografia di affinità?
La cromatografia di affinità è una tecnica analitica e un metodo di separazione che dipende da una specifica interazione di legame tra un ligando immobilizzato e il suo partner di legame. Alcuni esempi includono il legame anticorpo-antigene, il legame enzima-substrato e il legame enzima-inibitore. Pertanto, questa tecnica ha molte importanti applicazioni nella purificazione dell'acido nucleico, nella purificazione delle proteine da estratti cellulari e nella purificazione del sangue.
In questa tecnica, la proprietà più importante è l'immobilizzazione del ligando. Per questo possiamo utilizzare vari materiali come acrilati e gel di silice. È importante prevenire l'interferenza sterica della molecola bersaglio sul ligando. Inoltre, un inibitore è attaccato alla fase solida. Chiamiamo questo inibitore un distanziatore. Classicamente, un distanziatore è costituito da una catena di idrocarburi.
La fase stazionaria della cromatografia di affinità contiene il nucleo, lo spaziatore e il ligando. A volte, ha anche uno ione metallico che è accoppiato al ligando. La fase solida più preferita per la fase stazionaria in questa tecnica è il gel di agarosio perché è facilmente erogabile per riempire e impacchettare la colonna con letti di resina di qualsiasi dimensione ed è abbastanza grande da consentire alle biomolecole di fluire liberamente dentro e attraverso le sfere. I ligandi possono legarsi in modo covalente al polimero di perline in vari modi. I composti distanziatori più comuni sono bromuro di cianogeno, epossido, epossido con acido C6 e diamina. D' altra parte, il ligando che possiamo usare differisce in base al target, ad esempio, anticorpo-antigene, ioni ferro o alluminio-fosfoproteine, avidina-biotina, glutatione-GST, chelatore-proteine marcate con His, ecc.
Qual è la differenza tra filtrazione su gel e cromatografia di affinità?
La cromatografia è un'importante tecnica analitica. La cromatografia a filtrazione su gel e la cromatografia di affinità sono due importanti variazioni della cromatografia. Il differenza fondamentale tra la filtrazione su gel e la cromatografia di affinità è quello la cromatografia di filtrazione su gel dipende dalle differenze di peso molecolare o dimensione del campione di analita, mentre la cromatografia di affinità dipende dall'affinità di un analita con un ligando immobilizzato.
Riepilogo – Filtrazione su gel vs cromatografia di affinità
Esistono diversi tipi di tecniche cromatografiche in base alla loro applicazione e alla natura del campione di analita. La filtrazione su gel e la cromatografia di affinità sono due di questi tipi di tecniche. Il differenza fondamentale tra la filtrazione su gel e la cromatografia di affinità è quello la cromatografia di filtrazione su gel dipende dalle differenze di peso molecolare o dimensione del campione di analita, mentre la cromatografia di affinità dipende dall'affinità di un analita con un ligando immobilizzato.
