Differenza chiave – HPLC vs HPTLC
La differenza fondamentale tra HPLC e HPTLC è che HPLC consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione mentre HPTLC non consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione.
La cromatografia è un metodo di separazione fisica utilizzato per separare e identificare i componenti di una miscela. Sia HPLC che HPTLC sono tecniche cromatografiche. HPLC è cromatografia liquida ad alte prestazioni. HPTLC è una cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni.
Cos'è l'HPLC?
HPLC è la cromatografia liquida ad alte prestazioni. È una tecnica analitica utilizzata per separare, identificare e quantificare i componenti di una miscela. In questa tecnica, il campione viene sciolto in un solvente adatto. Quindi il solvente con il campione viene fatto passare attraverso una pompa con una determinata pressione. La pompa è riempita con materiale adsorbente solido. Quindi alcuni componenti si legano fortemente al materiale assorbente mentre altri componenti si legano in modo lasco. Ciò fa sì che i componenti abbiano portate diverse attraverso la pompa. Pertanto, i componenti possono essere separati facilmente.
Figura 01: Un sistema HPLC
Il materiale adsorbente che riempie la pompa è noto come fase stazionaria. Il solvente con il campione disciolto è noto come fase mobile. La pompa utilizzata in questa tecnica è chiamata colonna. La colonna è riempita con un materiale adsorbente, più comunemente particelle di silice. La dimensione di queste particelle può variare da 2 a 50 μm. Il processo di separazione è influenzato dalla composizione della fase mobile e dalla temperatura del sistema. Le interazioni tra la fase stazionaria e il componente nel campione possono essere interazioni idrofobiche, interazioni dipolo-dipolo, legami ionici, ecc.
La pressione di esercizio dell'HPLC è notevolmente superiore a quella della cromatografia liquida tradizionale. Si trova a circa 50-350 bar. La differenza tra cromatografia liquida e HPLC è che nella cromatografia liquida, il campione cade attraverso la colonna per gravità mentre, in HPLC, il campione viene pressurizzato attraverso la colonna. Anche le dimensioni della colonna e delle particelle assorbenti sono molto ridotte rispetto alla tradizionale cromatografia liquida. Tuttavia, la risoluzione data dalla tecnica HPLC è superiore.
Cos'è HPTLC?
HPTLC è una cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni. È la forma avanzata e automatizzata delle tradizionali TLC. Questa tecnica fornisce una risoluzione efficiente in un breve periodo di tempo. In questo metodo di analisi, il campione e un riferimento possono essere analizzati contemporaneamente, il che consente di confrontare il campione con il riferimento. Offre una migliore precisione analitica rispetto ad altre tecniche cromatografiche. Il tempo impiegato per l'analisi è inferiore. La tecnica è una tecnica a basso costo.
Figura 02: un'analisi dei coloranti alimentari utilizzando HPTLC
Il metodo HPTLC è un processo semplice e anche la fase di preparazione del campione viene eliminata (nella TLC tradizionale, la fase di preparazione del campione è inclusa prima della separazione. Questa fase prevede la pulizia e l'arricchimento). Il solvente può essere utilizzato direttamente senza alcun pretrattamento sebbene altre tecniche cromatografiche richiedano pretrattamenti come degasaggio, filtrazione, ecc.
Il materiale adsorbente utilizzato in HPTLC è silice con dimensioni delle particelle molto piccole. Nella TLC tradizionale, la dimensione delle particelle di silice è di 5-20 μm mentre, in HPTLC, è di 4-8 μm. Il campione viene applicato alla piastra HPTLC utilizzando un applicatore. Dà un'applicazione uniforme e sicura. Quindi le piastre vengono poste in una camera avente la fase mobile. La camera deve essere saturata con il vapore della fase mobile. Dopo il processo HPTLC, i punti che si sono spostati possono essere rilevati. Quando si rilevano i punti sulla lastra, la tecnica HPTLC utilizza una regione UV adatta o una camera di iodio.
Qual è la differenza tra HPLC e HPTLC?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC è cromatografia liquida ad alte prestazioni. | HPTLC è una cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni. |
| Tecnica | |
| In HPLC, la fase mobile con il solvente viene fatta passare attraverso una colonna riempita con la fase stazionaria. | In HPTLC, il campione viene individuato su una piastra TLC e posto all'interno di una camera contenente la fase mobile; quindi il campione può migrare verso l' alto della piastra insieme alla fase mobile. |
| Misurazione | |
| In HPLC, le differenze tra le portate dei componenti attraverso la colonna vengono utilizzate per separare i componenti nel campione. | In HPTLC, le differenze tra le distanze percorse da ciascun componente del campione vengono utilizzate per separare i componenti del campione. |
| Separazione quantitativa | |
| HPLC consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione. | HPTLC non consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione. |
Riepilogo – HPLC vs HPTLC
HPLC e HPTLC sono due tecniche cromatografiche. Il differenza fondamentale tra HPLC e HPTLC è quello HPLC consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione mentre HPTLC non consente la separazione quantitativa dei componenti in un campione.
