La differenza fondamentale tra la colorazione di Coomassie e quella d'argento è che la colorazione di Coomassie è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza una colorazione blu brillante di Coomassie, mentre la colorazione del nastro è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza una colorazione d'argento.
La separazione e l'identificazione delle proteine sono passaggi critici nell'analisi del proteoma. Hanno bisogno della caratterizzazione delle proteine ad alta risoluzione dopo l'elettroforesi su gel. Esistono numerose tecniche di colorazione che includono coloranti diversi come coloranti anionici (coomassie brillante blu), cationi metallici (imidazolo-zinco), coloranti d'argento e coloranti fluorescenti, ecc. A volte possono essere utilizzate anche sonde radioattive. La scelta della tecnica di colorazione dipende dalla semplicità, dalla disponibilità di apparecchiature di imaging in laboratorio, ecc.
Cos'è la colorazione Coomassie?
La colorazione Coomassie è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza una colorazione blu brillante coomassie. Viene generalmente chiamata la tecnica del blu di coomassie. Il blu brillante di Coomassie è il colorante proteico anionico più popolare. Questa colorazione normalmente colora quasi tutte le proteine con una buona linearità quantitativa a sensibilità media. La colorazione blu brillante di Coomassie si lega in modo non specifico a quasi tutte le proteine. Esistono due diverse varianti di colorazione blu brillante di coomassie: R-250 e G-250. R-250 offre tempi di colorazione più brevi, mentre G-250 è disponibile in formulazioni più sensibili e rispettose dell'ambiente.
Figura 01: Colorazione di Coomassie
I coloranti Coomassie sono molto popolari negli studi di spettrometria di massa e negli studi di identificazione delle proteine. Inoltre, la macchia di coomassie bio-safe è una formulazione non pericolosa di blu coomassie G-250 attualmente disponibile sul mercato. Il vantaggio di questa formulazione è che richiede solo acqua per il risciacquo e la decolorazione. Il colorante coomassie bio-sicuro offre una sensibilità equivalente al convenzionale blu coomassie G-250 ma migliore del colorante coomassie R-250. Inoltre, ha un protocollo di colorazione più semplice e veloce rispetto al convenzionale Coomassie blue G-250. Lo svantaggio della colorazione blu coomassie è che è meno sensibile rispetto alla colorazione argento. La colorazione blu di Coomassie è circa 50 volte meno sensibile della colorazione argento. Tuttavia, per la sua semplicità di rilegatura, è preferito in molti studi.
Cos'è la colorazione argento?
La colorazione argento è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza una colorazione argento. La colorazione argento viene utilizzata per colorare sia i gel di agarosio che quelli di poliacrilammide. La colorazione argento delle proteine nei gel di agarosio è stata sviluppata per la prima volta nel 1973 da Kerenyi e Gallyas. Successivamente, è stato adattato per le proteine nei gel di poliacrilammide utilizzati in SDS-PAGE. Attualmente, la colorazione con argento viene utilizzata anche per la colorazione del DNA o dell'RNA. Per colorare i gel, i gel vengono incubati con una soluzione di nitrato d'argento in questo metodo. La colorazione argento colora i siti in cui le proteine sono presenti dal marrone al nero.
Figura 02: Colorazione argento
L'intensità della colorazione argento dipende dalla struttura primaria della proteina. Inoltre, anche la pulizia dei recipienti utilizzati e la purezza dei reagenti possono influenzare la qualità della colorazione dell'argento. Tuttavia, lo svantaggio della colorazione con argento è che non è in grado di rilevare tutte le proteine, in particolare le glicoproteine e le proteine con grandi gruppi modificati attaccati alle loro catene laterali.
Quali sono le somiglianze tra Coomassie e colorazione argento?
- Coomassie e la colorazione con argento sono due tecniche utilizzate nella colorazione delle proteine.
- Possono colorare sia le proteine che il DNA.
- Entrambe le tecniche di colorazione presentano degli svantaggi.
- Queste tecniche hanno passaggi simili, come il fissaggio, la colorazione e la decolorazione.
Qual è la differenza tra Coomassie e colorazione argento?
La colorazione di Coomassie è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza la colorazione blu brillante di Coomassie, mentre la colorazione del nastro è una tecnica di colorazione delle proteine che utilizza la colorazione d'argento. Quindi, questa è la differenza chiave tra Coomassie e la colorazione dell'argento. Inoltre, la colorazione Coomassie è meno sensibile della colorazione argento.
L'infografica di seguito elenca le differenze tra Coomassie e la colorazione argento in forma tabellare per un confronto fianco a fianco.
Riepilogo – Coomassie vs Silver Staining
Per visualizzare le proteine, è possibile eseguire una reazione chimica specifica per legare il colorante o produrre colore. Questo è chiamato colorazione delle proteine. La colorazione Coomassie e argento sono due tecniche utilizzate nella colorazione delle proteine. La tecnica di colorazione Coomassie utilizza la colorazione blu brillante di Coomassie mentre la colorazione del nastro utilizza la colorazione argento. Quindi, questa è la differenza chiave tra la colorazione Coomassie e l'argento.
