La differenza fondamentale tra i vettori di inserimento e di sostituzione è che il vettore di inserimento ha la capacità di inserire lunghezze moderate di DNA estraneo mentre il vettore di sostituzione ha la capacità di ospitare lunghezze maggiori di DNA estraneo.
I vettori fagici sono i batteriofagi utilizzati per la clonazione. Esistono due tipi di vettori fagici; sono vettori di inserimento e vettori di sostituzione. Inoltre, tutti i vettori fagici sono costituiti da geni non essenziali. Tuttavia, questi geni devono essere rimossi dai fagi per facilitare nuovi inserti di DNA estraneo.
Cos'è un vettore di inserimento?
Prima di tutto, il vettore di inserimento è la forma più semplice di vettori di clonazione lambda. In effetti, è un tipo di vettore fagico che ha un sito di restrizione unico introdotto all'interno del genoma del vettore nella posizione del DNA opzionale. Inoltre, il DNA fagico rimane senza rimozione. Questa non rimozione del DNA fagico riduce le dimensioni degli inserti (DNA estraneo) da clonare all'interno del vettore. Inoltre, questi vettori sono utili nella clonazione e nell'espressione del cDNA. GT10, GT11 e Zap sono esempi di questo vettore.
Figura 01: Lambda Phage
Il vettore di inserimento consiste in un unico sito di riconoscimento. La funzione principale di questo vettore è sviluppare librerie di cDNA derivate da sequenze di mRNA eucariotiche. Inoltre, può ospitare solo lunghezze di DNA estraneo comprese tra 05-11 kb. Inoltre, possiede un sito di scissione unico per l'inserimento di DNA estraneo.
Cosa sono i vettori sostitutivi?
Il vettore di sostituzione o vettore di sostituzione è un tipo di vettore fagico sviluppato dalla rimozione di una regione intermedia del "frammento di riempimento" del DNA fagico. L'inserto di DNA estraneo desiderato sostituisce il DNA fagico.
Figura 02: vettore sostitutivo
I vettori di sostituzione sono importanti nella creazione di librerie genomiche come EMBL4 e Charon40. Questi vettori possono ospitare una lunghezza maggiore di DNA estraneo che varia tra 08-24kb di lunghezza. La regione di riempimento consiste anche in un gene che rende il vettore fagico non vitale all'interno di un ospite batterico.
Quali sono le somiglianze tra i vettori di inserimento e di sostituzione?
- I vettori di inserimento e sostituzione sono vettori di fagi.
- Entrambi i vettori ospitano inserti di DNA estraneo.
- Sono entrambi utili per creare librerie di DNA.
Qual è la differenza tra vettori di inserimento e sostituzione?
Vettori di inserimento e sostituzione |
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| Il vettore di inserimento è un tipo di vettore fagico che ha un sito di restrizione introdotto all'interno del genoma del fago nel sito del DNA opzionale. | Il vettore di sostituzione è un tipo di vettore fagico sviluppato dalla rimozione di una regione intermedia del "frammento di riempimento" del DNA fagico |
| Dimensione dei frammenti di inserto | |
| 05-11 kb di lunghezza | 08-24 kb di lunghezza |
| Frammento di riempimento | |
| Nessun frammento di riempimento | Il frammento di riempimento viene sostituito da un inserto esterno |
| Funzione | |
| Importante per creare librerie di cDNA | Importante nella creazione di librerie di genomi |
| Esempi | |
| GT10, GT11 e Zap sono esempi | EMBL4 e Caronte40 sono esempi |
| Sito di scollatura | |
| È presente un sito di clivaggio unico | Il sito di clivaggio contiene geni che non sono essenziali per il ciclo litico |
Riepilogo – Vettori di inserimento e sostituzione
Sia i vettori di inserimento che di sostituzione sono due tipi di vettori fagici. Entrambi i vettori hanno siti di restrizione che facilitano la sistemazione di nuovi inserti di DNA estraneo. I vettori di inserimento sono importanti nella creazione di librerie di cDNA mentre i vettori di sostituzione sono importanti nella creazione di librerie genomiche. Inoltre, i vettori di inserimento ospitano inserti di DNA di lunghezza moderata. Ma i vettori di sostituzione possono ospitare lunghezze maggiori di inserti di DNA estraneo. In generale, questa è la differenza chiave tra i vettori di inserimento e sostituzione.
