La differenza fondamentale tra il dosaggio BCA e quello Bradford è che il dosaggio BCA richiede tempo e meno accurato, mentre il dosaggio Bradford è rapido e accurato.
Il dosaggio BCA e Bradford sono due metodi di dosaggio per la determinazione della concentrazione proteica. Questi due test hanno principi di analisi differenti e differenze nella loro accuratezza.
Cos'è il test BCA?
Il saggio BCA o saggio dell'acido bicinconinico è un saggio biochimico utile per determinare la concentrazione totale di proteine in una soluzione. Questo metodo prende anche il nome di saggio Smith dal suo inventore, Paul K. Smith. Questo metodo analitico mostra somiglianze con il test delle proteine Lowry, il test delle proteine Bradford o il reagente del biureto. Possiamo osservare la concentrazione proteica totale in un dato campione attraverso un cambiamento di colore della soluzione del campione, che va dal verde al viola. Questo cambiamento di colore avviene in proporzione al contenuto proteico. Successivamente possiamo utilizzare una tecnica colorimetrica per analizzare l'intensità del colore e il contenuto proteico nel campione.
Metodo BCA di stima delle proteine
Se si considera il meccanismo del dosaggio BCA, la tipica soluzione BCA contiene una soluzione altamente alcalina con un pH di circa 11,25 e gli ingredienti di questa soluzione includono acido bicinconinico, carbonato di sodio, bicarbonato di sodio, tartrato di sodio e solfato di rame (II) pentaidrato. Questo test dipende principalmente da due reazioni chimiche: la riduzione del rame(II) in rame(I) da parte dei legami peptidici nelle proteine e la chelazione di due molecole di acido bicinconinico con lo ione rame(I), risultando in un complesso di colore viola che può assorbire la luce a una lunghezza d'onda di 562 nm. Nella prima reazione, la quantità di rame(II) ridotta dai legami peptidici è proporzionale alla quantità di proteine nel campione.
Cos'è il saggio Bradford?
Il saggio Bradford è un metodo analitico spettroscopico utile per misurare la concentrazione di proteine in una soluzione. Questo metodo è stato sviluppato da Marion M. Bradford nel 1976 ed è un metodo relativamente rapido e accurato.
Reazione cromatica delle proteine e del reagente Bradford
Possiamo utilizzare questo metodo per determinare la concentrazione della quantità di proteine in un campione. La reazione chimica che ha luogo nel campione durante questo test dipende esclusivamente dalla composizione aminoacidica della proteina nel campione.
Metodo Bradford per la stima delle proteine
Se si considera il metodo di questo test, si tratta di un test colorimetrico delle proteine basato sullo spostamento dell'assorbanza del colorante chiamato Coomassie Brilliant Blue G-250. Generalmente, questo colorante esiste in tre forme: forma anionica (blu), forma neutra (verde) e forma cationica (rossa). Pertanto, in condizioni acide, il colorante cambia colore dal rosso al blu. Ciò è dovuto al legame della proteina con il colorante. Al contrario, se non ci sono proteine da legare con il colorante, il cambiamento di colore non compare, la soluzione assume un colore rosso-marrone. Questo colorante è in grado di formare un forte complesso non covalente con il gruppo carbossilico della proteina attraverso le forze di Van der Waal e le attrazioni elettrostatiche.
Qual è la differenza tra il dosaggio BCA e Bradford?
Il dosaggio BCA e Bradford sono due metodi di dosaggio per la determinazione della concentrazione proteica. Questi due test hanno diversi principi di analisi e differenze nella loro accuratezza. Il differenza fondamentale tra il dosaggio BCA e Bradford è quello il dosaggio BCA richiede tempo e meno accurato, mentre il dosaggio Bradford è rapido e accurato.
La seguente infografica riassume le differenze tra il dosaggio BCA e quello di Bradford in forma tabellare.
Riepilogo – BCA vs Bradford Assay
Il saggio BCA o saggio dell'acido bicinconinico è un saggio biochimico utile per determinare la concentrazione totale di proteine in una soluzione. Il saggio Bradford è un metodo analitico spettroscopico utile per misurare la concentrazione di proteine in una soluzione. La differenza fondamentale tra il dosaggio BCA e Bradford è che il BCA richiede tempo e meno accurato, mentre il dosaggio Bradford è rapido e accurato.
