La differenza chiave tra BL21 e DH5 Alpha è che BL21 è una cellula di E. coli competente geneticamente modificata e carente di proteasi utilizzata principalmente per l'espressione proteica, mentre DH5 Alpha è una cellula di E. coli competente geneticamente modificata con mutazione recA1 utilizzata principalmente per la trasformazione del plasmide.
E. coli è uno dei famosi organismi d'elezione per la produzione di proteine ricombinanti. È diventata la piattaforma di espressione più popolare nel corso degli anni. Viene utilizzato anche come fabbrica di celle. BL21 e DH5 Alpha sono due cellule di E. coli geneticamente modificate attualmente utilizzate rispettivamente per l'espressione proteica e la trasformazione del plasmide.
Cos'è BL21?
BL21 è una cellula E.coli competente geneticamente modificata e carente di proteasi utilizzata principalmente per l'espressione proteica. E. coli BL21 è una cellula batterica derivata dal ceppo B. Presenta difetti della proteasi Lon e della proteasi della membrana esterna ompT. È comunemente usato per l'espressione proteica ricombinante perché normalmente porta stabilità alle proteine espresse. BL21 è utile per l'espressione proteica con pCold I-IV DNA e pCold TF DNA. Ma questa cellula competente di E. coli non è destinata a un sistema di espressione proteica che utilizza il promotore T7 come il sistema pET. La ragione di ciò è che BL21 non esprime l'RNA polimerasi T7. Inoltre, non è raccomandato l'uso per la costruzione o la preparazione del plasmide poiché non ha la mutazione recA.
Figura 01: BL21
BL21 è stato descritto per la prima volta da Studier nel 1986 dopo varie modifiche della linea B. Le cellule BL21 sono carenti della proteasi LON, che degrada molte proteine estranee. Inoltre, manca un altro gene che codifica per la proteasi della membrana esterna (OmpT) la cui funzione è quella di degradare le proteine extracellulari. La mancanza di queste proteine innesca la produzione di successo di proteine estranee nelle cellule di E. coli BL21. Inoltre, la mutazione hsdSB in queste cellule previene la metilazione del DNA estraneo e l'interruzione nelle cellule BL21.
Cos'è DH5 Alpha?
DH5 Alpha è una cellula di E. coli competente geneticamente modificata con mutazione recA1 che viene utilizzata principalmente per la trasformazione del plasmide. Le cellule DH5 Alpha E. coli sono geneticamente modificate dal biologo americano Douglas Hanahan per massimizzare l'efficienza della trasformazione. La cellula DH5 Alpha ha tre distinte mutazioni: recA1, endA1 e lacZΔM15. recA1 è una mutazione a punto singolo che sostituisce la glicina 160 con e un residuo di acido aspartico nel polipeptide recA. Questa mutazione disabilita l'attività delle ricombinasi e inattiva la ricombinazione omologa. La mutazione endA1 inattiva un'endonucleasi intracellulare che le impedisce di degradare il plasmide inserito.
Figura 02: DH5 Alpha
Inoltre, la mutazione lacZΔM15 consente lo screening bianco-blu delle cellule trasformate. Queste cellule sono cellule competenti. Sono spesso usati con la trasformazione del cloruro di calcio per inserire il plasmide desiderato. È stato identificato da ricerche recenti che la cellula DH5 Alpha con il metodo Hanahan era la cellula competente più efficiente per la trasformazione del plasmide.
Quali sono le somiglianze tra BL21 e DH5 Alpha?
- BL21 e DH5 Alpha sono due E.coli geneticamente modificati
- Entrambe sono cellule competenti.
- Sono costituiti da mutazioni distinte.
- Entrambi non hanno habitat naturale.
- Questi sono usati per scopi di laboratorio come studi sull'espressione e procedure di clonazione.
Qual è la differenza tra BL21 e DH5 Alpha?
BL21 è una cellula di E. coli competente geneticamente modificata e carente di proteasi utilizzata principalmente per l'espressione proteica. D' altra parte, DH5 Alpha è una cellula di E. coli competente geneticamente modificata con mutazione recA1 utilizzata principalmente per la trasformazione del plasmide. Quindi, questa è la differenza chiave tra BL21 e DH5 Alpha. Inoltre, la cellula BL21 di E. coli non ha la mutazione recA1, mentre la cellula DH5 Alpha E. coli ha la mutazione recA1.
La seguente infografica elenca le differenze tra BL21 e DH5 Alpha in forma tabellare.
Riepilogo – BL21 vs DH5 Alpha
I ceppi non patogeni di E. coli sono geneticamente sviluppati da scienziati per studi di espressione di laboratorio e scopi di clonazione. BL21 e DH5 Alpha sono due cellule di E. coli geneticamente modificate. BL21 è utilizzato principalmente per studi sull'espressione proteica. D' altra parte, DH5 Alpha è utilizzato principalmente per scopi di trasformazione dei plasmidi. Quindi, questo è il riassunto della differenza tra BL21 e DH5 Alpha.
