Differenza chiave – CFU vs MPN
L'unità formante colonia (CFU) e il numero più probabile (MPN) sono due metodi utilizzati per enumerare i microrganismi nei campioni. Entrambi i parametri vengono utilizzati per rilevare la qualità dell'acqua e i batteri indicatori fecali nei campioni d'acqua. L'unità di formazione delle colonie è una misura utilizzata per enumerare il numero di cellule batteriche vitali o di cellule fungine nel volume o nel peso specifico di un dato campione. L'unità standard per questo parametro è CFU/ml o CFU/g. Il numero più probabile è un' altra unità utilizzata per misurare il numero di cellule batteriche vitali in un campione liquido. Il differenza fondamentale tra CFU e MPN è quello CFU viene calcolato dalle colonie batteriche e fungine che crescono su una piastra di agar solido mentre l'MPN viene calcolato da batteri vitali che crescono in un mezzo liquido.
Che cos'è il CFU?
L'unità formante colonia (CFU) è un parametro che misura il numero di cellule batteriche o fungine vitali in un dato campione. Il metodo che conta le unità formanti colonie è indicato come conteggio delle piastre standard. Le colonie vitali che appaiono sulle piastre di agar sono espresse come CFU per 1 ml (unità formanti colonie per millilitro) di campione per liquidi o CFU per 1 g (unità formanti colonie per grammo) di campione per solidi.
Ci sono due metodi comuni usati per misurare le CFU in un campione. Sono il metodo del piatto di diffusione e il metodo del piatto di colata. Questi due metodi sono supportati da una tecnica chiamata diluizione seriale. I campioni diluiti in serie consentono di ottenere un numero numerabile di colonie sulla superficie dell'agar. Un volume noto di campione può essere distribuito sulla superficie di una piastra di agar o mescolato con agar e versato su una piastra. La piastra viene quindi incubata e si contano le colonie che si formano. Il numero di colonie si riferisce al numero di microrganismi all'interno del campione originale. Le piastre che mostrano troppe colonie o troppo poche colonie sono escluse dal conteggio perché i risultati potrebbero non essere statisticamente accurati su quelle piastre. Statisticamente, l'intervallo migliore è di 30-300 colonie su una piastra di agar. Quindi, le piastre corrette dovrebbero essere selezionate per un'enumerazione accurata. La diluizione seriale viene eseguita per la funzione di cui sopra.
Una volta contato il numero di colonie vitali sulle piastre, è possibile calcolare CFU/ml utilizzando la seguente equazione.
CFU per ml di campione originale=numero di colonie su una piastra X fattore di diluizione
Fattore di diluizione=(1/ Diluizione della piastra)
Ad esempio, se si ottengono 149 colonie sulla piastra della diluizione 10-4, il numero di batteri in 1 ml del campione originale può essere calcolato come segue:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 o 1490000
=1. 49 x 106
Figura 01: Unità di formazione di colonie
Cos'è MPN?
Il numero più probabile è una misura alternativa a CFU/ml. MPN stima anche le cellule vitali in un campione liquido. Conta gli organismi che crescono in una coltura liquida ed è una tecnica prevalentemente batteriologica. Questo metodo è particolarmente utile per campioni che contengono basse concentrazioni di cellule batteriche; ad esempio latte, acqua potabile ecc. Il valore MPN è espresso per 100 ml di volume. MPN si basa su un metodo statistico basato sulla teoria della probabilità. Esistono tabelle statistiche progettate per trovare i valori MPN per 100 ml di campione. Queste tabelle mostrano i risultati con limiti di confidenza del 95%.
Il valore MPN viene calcolato dopo aver eseguito una tecnica chiamata metodo di fermentazione a provette multiple. Tre set di provette contenenti un mezzo di coltura adatto vengono inoculate con tre diversi volumi del campione come 10 ml, 1 ml e 0.1 ml e incubato per la crescita. Dopo il periodo di incubazione, le provette vengono valutate + (positivo) o – (negativo) per la presenza o assenza di crescita. Il pattern dei risultati positivi e negativi viene quindi confrontato con una tabella MPN di probabilità statistiche per stimare il numero di microrganismi. Quindi viene fornito il valore MPN per 100 ml di campione. MPN è ampiamente utilizzato per rilevare i batteri coliformi presenti nei campioni d'acqua.
Figura 02: tabella MPN
Qual è la differenza tra CFU e MPN?
CFU vs MPN |
|
| CFU è una misura utilizzata per esprimere il numero di colonie batteriche o fungine vitali in un dato campione. | MPN è una misura alternativa alle CFU e misura il numero di cellule batteriche vitali in un campione liquido. |
| Unità | |
| CFU/ml o CFU/g | MPN/100 ml |
| Calcolo | |
| CFU si calcola contando il numero di colonie cresciute su piastre di agar. | MPN viene calcolato confrontando i modelli positivi e negativi dei tubi con la tabella statistica MPN. |
| Tecnica di diluizione seriale | |
| La diluizione seriale viene eseguita prima di posizionare i campioni su piastre di agar. | La diluizione seriale non viene normalmente eseguita quando si calcola l'MPN |
| Metodi | |
| Il metodo Spread plate e il metodo pour plate sono due tipi di metodi eseguiti per ottenere CFU. | La fermentazione in provette multiple è il metodo eseguito per ottenere il valore MPN. |
Riepilogo – CFU vs MPN
La misurazione della crescita microbica è necessaria per molte ragioni. Negli impianti di trasformazione alimentare, è necessario misurare il livello e il tipo di microrganismi negli alimenti. Nell'industria alimentare e nella medicina, è necessario garantire che i trattamenti di sterilizzazione siano applicati in modo efficace. Negli impianti di trattamento delle acque reflue, è necessario eseguire regolarmente la conta microbica. Quando si ottimizza la procedura in biologia molecolare, è necessario misurare il numero di colonie sulle piastre. Pertanto, sono disponibili diversi metodi di enumerazione e misurazione della crescita. CFU e MPN sono due di questi metodi ampiamente adottati in vari campi. CFU è una misura del numero di colonie batteriche e fungine vitali presenti in un dato campione. Viene calcolato utilizzando il metodo di conteggio delle piastre standard o il metodo di conteggio delle piastre praticabile. MPN è un' altra misura che esprime il numero di cellule batteriche presenti in un dato volume del campione liquido. Viene calcolato utilizzando il metodo di fermentazione a provette multiple e la tabella MPN. Questa è la differenza tra CFU e MPN.
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