Differenza chiave: nitrocellulosa vs membrana in nylon
Il blotting è una tecnica importante per il rilevamento di sequenze specifiche di DNA, RNA e proteine dalle loro miscele in biologia molecolare. È fatto usando una membrana chiamata blot. Esistono diverse tecniche di blotting come il blotting settentrionale, meridionale e occidentale. La selezione di una membrana adeguata per il processo di blotting dovrebbe essere eseguita con attenzione per prevenire il legame non specifico e rilevamenti errati. Nitrocellulosa, nylon e PVDF sono membrane comunemente utilizzate nelle tecniche di blotting. Hanno caratteristiche diverse. Il differenza fondamentale tra nitrocellulosa e membrana di nylon è quello le membrane di nitrocellulosa hanno un alto potenziale di immobilizzazione delle proteine mentre le membrane di nylon hanno un alto potenziale di immobilizzazione dell'acido nucleico. Tuttavia, entrambi i tipi di membrane sono usati frequentemente nelle tecniche di blotting.
Cos'è una membrana di nitrocellulosa?
La membrana di nitrocellulosa è un filtro a membrana comunemente usato nelle tecniche di blotting degli acidi nucleici e delle proteine. Ha un alto potenziale di legame proteico. Pertanto, le membrane di nitrocellulosa sono ampiamente utilizzate nella tecnica del western blotting. Le membrane di nitrocellulosa sono compatibili con tutte le tecniche di ibridazione e mostrano capacità di legame superiori senza interferenze. Le membrane di nitrocellulosa sono naturalmente di natura idrofila. Fanno interazione idrofila con le molecole e le immobilizzano in modo efficiente sulla membrana. Le membrane in nitrocellulosa commerciali sono disponibili in due dimensioni dei pori: 0,45 e 0,2 µm.
Figura 01: Membrana di nitrocellulosa utilizzata nel western blotting
Cos'è una membrana in nylon?
La membrana in nylon è un altro tipo di membrana commerciale utilizzata nelle tecniche di blotting. Viene utilizzato in alternativa con membrane di nitrocellulosa per il Southern e Northern blotting. Le membrane in nylon sono ideali per il Southern blotting rispetto alla nitrocellulosa grazie alla loro elevata affinità di legame con il DNA. A causa di diverse caratteristiche uniche delle membrane di nylon, i ricercatori usano comunemente membrane di nylon per la macchia meridionale e settentrionale invece che sulla membrana di nitrocellulosa. Le membrane in nylon sono consigliate anche per lo stripping e il reprobing, a differenza della nitrocellulosa.
Figura 02: Membrana in nylon utilizzata per il Southern blotting
Qual è la differenza tra la nitrocellulosa e la membrana in nylon?
Nitrocellulosa vs Membrana di nylon |
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| Le membrane di nitrocellulosa sono fragili. | Le membrane in nylon sono meno fragili. |
| Trattamento | |
| Sono difficili da gestire. | Sono facili da maneggiare. |
| Riprova | |
| Le membrane di nitrocellulosa non supportate sono difficili da riprovare. | Reprobing è facile con le membrane in nylon. |
| Compatibilità con varie condizioni di conservazione | |
| Le membrane in nitrocellulosa hanno una resistenza inferiore per resistere a varie condizioni di conservazione. | Le membrane in nylon rispondono in modo più robusto a varie condizioni di conservazione. |
| Usa | |
| È necessaria la preumidificazione. | La preumidificazione non è richiesta per le membrane in nylon. |
| Natura idrofila | |
| Le membrane in nitrocellulosa sono di natura idrofila ma sono meno idrofile delle membrane in nylon. | Sono di natura altamente idrofila. |
| Potenziale di immobilizzazione | |
| Le membrane di nitrocellulosa hanno meno affinità per gli acidi nucleici. Ma ha un'elevata affinità per le proteine. | Le membrane di nylon hanno un elevato potenziale di legame con gli acidi nucleici rispetto alle membrane di nitrocellulosa. |
Riepilogo – Nitrocellulosa vs membrana di nylon
Le membrane in nitrocellulosa e nylon sono fogli speciali utilizzati nella tecnica del blotting per riprodurre il motivo a bande sul gel. Consentono la possibilità di rilevare una sequenza specifica o una proteina dalle miscele immobilizzandole sulla membrana. Una volta che le molecole sono state immobilizzate sulla membrana, possono essere utilizzate come substrato per l'analisi di ibridazione con sonde etichettate. La membrana di nitrocellulosa è comunemente usata per il rilevamento delle proteine nella tecnica del western blotting grazie alla sua elevata affinità di legame con le proteine. Le membrane di nylon sono spesso utilizzate per il blotting meridionale e settentrionale. Questa è la differenza tra nitrocellulosa e membrana di nylon.
