La differenza fondamentale tra la piastra di versamento e la piastra di diffusione è che un volume noto del campione viene sparso sulla superficie del mezzo agar nella piastra di diffusione, mentre, nella piastra di versamento, un volume noto del campione viene miscelato con agar e poi versato in un piatto. Quando si confronta l'accuratezza di queste due tecniche, la piastra di colata ha una precisione maggiore rispetto alla piastra di diffusione.
Il metodo di conteggio su piastra standard è un approccio basato sulla crescita che conta il numero di microrganismi viventi (in crescita/coltivabili/vitali) all'interno di un campione. È un metodo potente in uso, in molti campi microbiologici per analizzare il numero di microrganismi viventi. I campi come cibo e prodotti lattiero-caseari, medico, ambientale, acquatico e agricolo, genetica microbica, microbiologia molecolare, sviluppo di mezzi di crescita e biotecnologie (tecnologia dei bioreattori, fermentazione, trattamento delle acque reflue/reflue ecc.) utilizzano questa tecnica. Inoltre, ci sono due modi principali per eseguire un conteggio delle lastre standard: sono la tecnica Spread plate e la tecnica Pour plate.
Cos'è il piatto di colata?
La tecnica della piastra versata è un metodo microbico per enumerare alcune cellule vitali presenti in un campione. La particolarità del metodo pour plate è che un volume noto del campione viene prima miscelato con agar e poi versato nella piastra.
Figura 01: Piatto di colata
Altri passaggi sono simili alla tecnica della piastra distesa discussa nella prossima sezione. Il passaggio successivo dopo aver versato l'agar miscelato con il campione consiste nel lasciarlo solidificare e incubare. Dopo l'incubazione, il conteggio del numero di colonie vitali è essenziale per calcolare le CFU finali per 1 go 1 ml.
Cos'è Spread Plate?
La piastra di diffusione è una tecnica per enumerare le cellule vitali in un campione. Per questa tecnica, è necessaria una diluizione seriale del campione per garantire che almeno una dia origine a un numero numerabile di colonie. Il processo qui consiste nel pipettare un determinato volume di diluizione sulla superficie di una piastra di agar e distribuirlo rapidamente e uniformemente sulla superficie dell'agar con una spatola di vetro, che è stata fiammata con alcol e raffreddata. L'esecuzione delle repliche è necessaria per ottenere un valore medio affidabile. Il passaggio successivo consiste nell'asciugare queste piastre per un breve periodo, quindi capovolgerle e metterle in un'incubatrice a una temperatura adeguata per la crescita e per un periodo di incubazione prestabilito.
Figura 02: Piatto di diffusione
Dopo l'incubazione, l'esame delle piastre mostrerà la crescita. A una o più diluizioni, il numero di cellule presenti negli inoculanti (es. 100 o 200μl) darà origine a tra 30 e 300 colonie discrete sulla superficie dell'agar. Meno di 30 colonie sono statisticamente inaffidabili. I conteggi superiori a 300 sono difficili da enumerare e sono soggetti a errori.
Quali sono le somiglianze tra il piatto di colata e il piatto di diffusione?
- Spread plate e pour plate sono due tecniche per ottenere il numero di cellule vitali presenti in un campione.
- Entrambi sono metodi semplici.
- Gli errori di campionamento possono verificarsi in entrambi i metodi.
- Le limitazioni delle condizioni di crescita influiscono sul risultato di entrambi i metodi.
- Anche gli errori tecnici possono interferire con il risultato finale di entrambi i metodi.
- Sebbene praticabili, i due metodi non sono in uso per coltivare batteri non coltivabili.
Qual è la differenza tra il piatto di colata e il piatto di diffusione?
Pour plate è una tecnica microbica per enumerare un numero di cellule vitali in un campione. La tecnica della piastra di diffusione è un' altra tecnica per enumerare i batteri cresciuti sulla superficie del supporto. Nella tecnica della piastra di versamento, il processo consiste nell'aggiungere il campione sulla superficie del mezzo solidificato sulla piastra di versamento. Ma, nella tecnica della piastra spred, il processo consiste nel mescolare il campione con l'agar fuso e poi versarlo nella piastra.
Per quanto riguarda l'accuratezza di queste due tecniche, il piatto di colata ha una precisione maggiore rispetto al piatto di diffusione. Inoltre, a differenza di una piastra di versamento, viene utilizzato uno spargitore di vetro per distribuire uniformemente il campione sulla superficie su una piastra di diffusione. Inoltre, utilizzando la piastra di scorrimento, è possibile enumerare gli aerobi, gli anaerobi e gli anaerobi facoltativi. Tuttavia, utilizzando la piastra di diffusione è possibile enumerare solo gli aerobi. Inoltre, per eseguire la piastra di diffusione sono necessarie piastre di agar solidificato, mentre per il metodo di colata sono necessari supporti di agar fuso liquido.
Riepilogo – Piatto di colata vs Piatto di diffusione
Pour plate e Spread plate sono due tecniche in microbiologia per facilitare l'enumerazione delle cellule microbiche in un campione. Entrambi i metodi sono basati sulla crescita, quindi misurano le cellule vitali. Durante la piastra di versamento, un volume noto del campione viene miscelato con l'agar fuso e versato nella piastra. Durante la piastra di diffusione, un volume noto viene sparso sulla superficie del mezzo di agar solidificato. Questa è la differenza tra il piatto di colata e il piatto di diffusione.
