La differenza chiave tra GFP ed EGFP è che la GFP è una proteina di tipo selvaggio incorporata nella clonazione molecolare di cellule non di mammiferi mentre l'EGFP è un tipo migliorato o ingegnerizzato di GFP che può essere utilizzato su cellule di mammifero.
La clonazione molecolare è una tecnica avanzata che gli scienziati utilizzano immensamente per esprimere le proteine tramite la tecnologia ricombinante. Nella tecnologia del DNA ricombinante, è necessario trasformare con successo il vettore ricombinante per ospitare l'organismo. Quindi, durante il processo di trasformazione, dovrebbe essere identificato e confermato se il gene di interesse è stato trasformato o meno nell'ospite. Per valutare questo, i biologi molecolari adottano diverse tecniche. Di queste tecniche, una è il gene reporter. Questi geni reporter agiscono come marcatori selezionabili per selezionare i trasformanti corretti. Pertanto, la Green Fluorescent Protein (GFP) e la Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) sono due proteine reporter utilizzate nella clonazione molecolare.
Cos'è GFP?
GFP è una proteina di tipo selvatico che contiene 238 residui di amminoacidi e diverse regioni selezionabili di sequenze di amminoacidi che la distinguono dalle altre proteine fluorescenti. Inoltre, questa proteina di tipo selvatico era originariamente isolata da Aequorea Victoria; un tipo di medusa. Tuttavia, nei fenomeni naturali, la medusa è stata in grado di produrre una fluorescenza di colore verde in risposta a determinati stimoli.
In precedenza, questo concetto ha sorpreso gli scienziati e hanno deciso di usarlo sulle loro tecnologie del DNA ricombinante. Di conseguenza, gli scienziati hanno utilizzato questa forma mutante del gene wild-type come gene reporter nei loro studi sull'espressione genica. Il gene wild-type della GFP è in grado di produrre una proteina che dà fluorescenza a temperatura ambiente o alla luce UV. Pertanto, quando inserito nei trasformanti, esprime e produce fluorescenza. Se la fluorescenza risulta dopo il processo di trasformazione, conferma il successo del processo di trasformazione. In parole semplici, l'emissione di fluorescenza segnala la riuscita trasformazione del vettore che trasporta il gene di interesse nell'ospite.
Figura 01: GFP
Per questo motivo, la GFP agisce come un marker in vivo dell'espressione genica. Attualmente, le tecniche di ingegneria genetica sono in uso per produrre GFP. Inoltre, sono disponibili molte versioni migliorate di GFP come EGFP. Pertanto, ciò consente un uso efficiente della GFP negli studi di clonazione molecolare e di espressione genica.
Cos'è EGFP?
Enhanced Green Fluorescent Protein o EGFP è una versione migliorata di GFP. In parole semplici, possiamo definire EGFP come una versione ingegnerizzata di GFP wild-type. Quando il gene wild-type della GFP muta, produce effetti benefici. Quindi, il gene mutato di GFP consente l'espressione di nuovi caratteri e, di conseguenza, possiamo produrre GFP potenziato con caratteristiche migliorate. Inoltre, possiamo introdurre mutazioni con successo nel gene GFP di tipo selvaggio utilizzando metodi di irradiazione o chimici. Questi geni mutati producono quindi l'EGFP, che ha caratteristiche più benefiche.
Figura 02: EGFP
Le caratteristiche migliorate di EGFP sono le seguenti;
- In grado di emettere segnali di fluorescenza più forti.
- Ha un'elevata sensibilità.
- Può usarlo su cellule di mammiferi invece di procarioti e altri eucarioti di livello inferiore.
- Inoltre, fornisce una maggiore purezza del prodotto.
Pertanto, rispetto a GFP, EGFP è la scelta preferita per gli studi sull'espressione genica. Tuttavia, il prodotto è più costoso rispetto a GFP.
Quali sono le somiglianze tra GFP ed EGFP?
- GFP ed EGFP sono due proteine che hanno la capacità di emettere il colore verde
- Pertanto, entrambe funzionano come proteine reporter negli studi sull'espressione genica.
- Inoltre, è possibile sintetizzare entrambi usando la tecnologia del DNA ricombinante.
- Inoltre, è facile mutare ulteriormente questi due tipi per sintetizzare forme migliorate.
Qual è la differenza tra GFP ed EGFP?
Il gene reporter è un gene che si lega al gene di interesse nella tecnologia del DNA ricombinante. Segnala la riuscita trasformazione del vettore ricombinante all'ospite. Qui, GFP ed EGFP sono due tipi di proteine fluorescenti verdi che funzionano come proteine reporter. Tuttavia, la differenza chiave tra GFP ed EGFP è che GFP è un tipo selvaggio mentre EGFP è una versione ingegnerizzata di GFP. Inoltre, EGFP ha caratteristiche più vantaggiose di GFP. Ad esempio, EGFP produce una luce fluorescente più forte ed è più sensibile del GFP. Un' altra differenza tra GFP ed EGFP sono i sistemi in cui possiamo utilizzarli. I sistemi non mammiferi utilizzano GFP mentre i sistemi mammiferi utilizzano EGFP.
L'infografica qui sotto presenta la differenza tra GFP ed EGFP in forma tabellare.
Riepilogo – GFP vs EGFP
GFP ed EGFP sono proteine reporter negli studi di clonazione molecolare e di espressione genica. GFP è la proteina wild-type, che è una proteina fluorescente verde. La proteina era inizialmente isolata dalla medusa Aequorea victoria. Al contrario, EFGP è una forma potenziata di proteina GFP. È un mutante del tipo selvatico con caratteristiche migliorate. Quindi, EFGP ha la maggiore potenza del segnale e una maggiore sensibilità. Pertanto, possiamo usarlo su vettori di mammiferi. Al contrario, l'uso della GFP è principalmente solo su vettori non mammiferi. In generale, questa è la differenza tra GFP ed EGFP.
