Differenza chiave – RNASE A vs RNASE H
Le ribonucleasi sono nucleasi che degradano specificamente l'RNA in unità più piccole. Possono essere divisi in due categorie; endoribonucleasi ed esoribonucleasi. L'endoribonucleasi è un'endonucleasi che può degradare l'RNA a filamento singolo o doppio. Scinde i legami fosfodiestere all'interno di una catena polinucleotidica di RNA. Gli esempi sono RNasi A, RNasi III, RNasi T1, RNasi P e RNasi H. L'esoribonucleasi è un'esonucleasi che ha degradato l'RNA rimuovendo i nucleotidi terminali dall'estremità 5'o 3'della molecola di RNA. Gli esempi sono RNasi R, RNasi II, RNasi D e RNasi PH. La differenza chiave tra RNASE A e RNASE H è che la RNasi A è una ribonucleasi pancreatica che degrada specificamente l'RNA a filamento singolo in componenti più piccoli mentre la RNasi H è un enzima non specifico che scinde l'RNA nell'ibrido RNA-DNA in unità più piccole tramite il meccanismo idrolitico.
Cos'è RNASE A?
La RNasi A è una ribonucleasi pancreatica che scinde specificamente i residui di citosina e uracile spaiati all'estremità 3' dell'RNA a filamento singolo. L'RNasi H funziona a una concentrazione di sale più elevata (concentrazione di NaCl 0,3 M o superiore). La reazione idrolitica è in due fasi. Forma un prodotto fosforilato 3' tramite l'intermedio monofosfato ciclico 2', 3'. Sebbene sia specifico dell'RNA a filamento singolo a una concentrazione di sale più elevata, può anche degradare l'RNA a doppio filamento e l'RNA nell'ibrido RNA-DNA a una concentrazione di NaCl inferiore (inferiore a 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield ha sintetizzato per primo questo enzima. La RNasi A è un enzima molto popolare nella ricerca molecolare. La RNasi A pancreatica bovina è un esempio di RNasi A. Ed è uno degli enzimi più resistenti utilizzati in laboratorio. Questo enzima non ha bisogno di un cofattore per la sua attività. È un enzima altamente termostabile. La RNasi A è il primo enzima e la terza proteina a cui è stata rilevata una corretta sequenza di amminoacidi. Questo enzima è molto piccolo con 124 aminoacidi e massa molecolare di 12600da. E ha quattro residui di istidina (His 12 e His 119 che coinvolgono nella reazione catalitica).
Figura 01: La RNasi A
RNasi A può essere isolata facendo bollire un campione grezzo. Quando bolle, tutti gli altri enzimi degradano la RNasi A rimanente. La RNasi A è un enzima sorprendentemente stabile. Questo enzima inibisce con l'inibitore della ribonucleasi proteine, metalli pesanti e complessi uridina vanadato.
Cos'è RNase H?
La RNasi H è un enzima ribonucleasico non specifico che può degradare l'RNA nell'ibrido RNA-DNA tramite reazione idrolitica. L'RNasi H scinde il 3'- il legame OP dell'RNA in un ibrido RNA-DNA. Alla fine produce prodotti terminati con fosfato 3'OH e 5'. Nella replicazione del DNA svolge un ruolo fondamentale rimuovendo il primer di RNA dopo che si sono formati nuovi filamenti di DNA. In condizioni di laboratorio, degrada specificamente l'RNA nell'ibrido RNA-DNA ma non nel DNA e nell'RNA non ibridato. E questo enzima viene solitamente utilizzato per distruggere lo stampo di RNA dopo che il primo filamento di DNA complementare si è formato durante la sintesi del cDNA.
Figura 02: RNasi H
RNasi H utilizza anche nei test di protezione della nucleasi. Può anche essere incorporato nella rimozione della coda poli A dall'mRNA. La RNasi H ha la capacità di distruggere l'RNA non codificante all'interno e all'esterno della cellula. Gli ioni metallici sono richiesti come cofattori per questa attività proteica. Un chelante (EDTA) può essere utilizzato per inibire l'enzima RNasi H.
Quali sono le somiglianze tra RNASE A e RNASE H?
- Entrambi sono di natura proteica.
- Entrambi sono endoribonucleasi
- Entrambi possono degradare l'RNA.
- Entrambi eseguono reazioni idrolitiche.
- I laboratori molecolari utilizzano entrambi.
Qual è la differenza tra RNASE A e RNASE H?
RNASE A vs RNASE H |
|
| La RNasi A è una ribonucleasi pancreatica che scinde specificamente l'estremità 3' dei residui di citosina e uracile spaiati dell'RNA a filamento singolo a una concentrazione di sale più elevata. | RNasi H è un enzima ribonucleasico non specifico che può degradare l'RNA nell'ibrido RNA-DNA tramite reazione idrolitica. |
| Natura della scissione dell'RNA | |
| RNasi A scinde specificamente l'RNA a filamento singolo a una concentrazione di sale più elevata. | RNasi H scinde l'RNA nell'ibrido RNA-DNA. |
| Necessità di cofattori per l'attività | |
| RNasi A non ha bisogno di cofattori per la sua attività. | RNasi H ha bisogno di ioni metallici come cofattori per la sua attività. |
| Inibitori dell'attività proteica | |
| I complessi di proteine, metalli pesanti e uridina vanadato inibitori della ribonucleasi inibiscono l'attività dell'RNAsi A. | Un chelante (EDTA) inibisce l'attività della RNasi H. |
| Rimozione del primer RNA nella replicazione del DNA | |
| La RNasi A non viene utilizzata per la rimozione del primer dell'RNA nella replicazione del DNA. | La RNasi H viene utilizzata per la rimozione del primer dell'RNA nella replicazione del DNA |
| Rimozione della sagoma del DNA nella sintesi del DNA complementare (C-DNA) | |
| La RNasi A non viene utilizzata per la rimozione del modello di RNA durante la sintesi del DNA complementare (C-DNA). | La RNasi H viene utilizzata per la rimozione del modello di RNA durante la sintesi del DNA complementare (C-DNA). |
| Rimozione della coda poli-A nell'mRNA ibridato con Oligo (dt) | |
| RNasi A non viene utilizzata per rimuovere la "coda poli-A" nell'mRNA ibridato con oligo (dt). | La RNasi H viene utilizzata per rimuovere la "coda poli-A" nell'mRNA ibridato con oligo (dt) |
Riepilogo – RNASE A vs RNASE H
Le ribonucleasi sono enzimi nucleasi che hanno la capacità di scindere l'RNA in unità più piccole. Sono di due tipi; endoribonucleasi ed esoribonucleasi. L'endoribonucleasi è un'endonucleasi che ha la capacità di degradare l'RNA a filamento singolo o doppio. E scinde il legame fosfodiestere all'interno di una catena polinucleotidica di RNA. La RNasi A e la RNasi H sono due endoribonucleasi. La RNasi A è una ribonucleasi pancreatica che scinde specificamente i residui di citosina e uracile spaiati all'estremità 3' dell'RNA a filamento singolo a una concentrazione di sale più elevata. La RNasi H è un enzima ribonucleasico non specifico che può degradare l'RNA nell'ibrido RNA-DNA tramite reazione idrolitica. Questa è la differenza tra RNasi A e RNasi H.
Scarica il PDF RNASE A vs RNASE H
Puoi scaricare la versione PDF di questo articolo e usarla per scopi offline come da nota di citazione. Si prega di scaricare la versione PDF qui Differenza tra RNASE A e RNASE H
