Differenza chiave: citometria a flusso e FACS
Nel contesto della teoria cellulare, le cellule sono l'unità strutturale e funzionale di base di tutti gli organismi viventi. L'ordinamento cellulare è una metodologia utilizzata per separare cellule diverse in base alle caratteristiche fisiologiche e morfologiche. Possono avere caratteristiche intracellulari o extracellulari. L'interazione di DNA, RNA e proteine sono considerate proprietà interattive intracellulari mentre la forma, le dimensioni e le diverse proteine di superficie sono considerate proprietà extracellulari. Nella scienza moderna, le metodologie di smistamento cellulare hanno portato ad assistere le diverse indagini negli studi biologici e anche nella definizione di nuovi principi attraverso la ricerca sulla medicina. Lo smistamento cellulare è condotto su varie metodologie che includono sia metodi primitivi con meno attrezzature sia metodologie tecnologiche avanzate con l'uso di macchinari sofisticati. Le principali metodologie utilizzate sono la citometria a flusso, lo smistamento cellulare attivato fluorescente (FACS), la selezione di cellule magnetiche e lo smistamento a cellula singola. Citometria a flusso e FACS sono sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche. FACS è un tipo specializzato di citometria a flusso. La citometria a flusso è una metodologia utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule in base a diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. FACS è un processo mediante il quale una miscela di campioni di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. Questa è la differenza chiave tra citometria a flusso e FACS.
Cos'è la citometria a flusso?
La citometria a flusso è un metodo utilizzato per esaminare e determinare l'espressione delle molecole intracellulari e della superficie cellulare e per definire e caratterizzare tipi cellulari distinti. Viene anche utilizzato per determinare il volume cellulare e la dimensione cellulare e per valutare la purezza delle sottopopolazioni che vengono isolate. Ciò consente la valutazione multiparametrica di singole celle all'incirca nello stesso momento. La citometria a flusso viene utilizzata per misurare l'intensità della fluorescenza prodotta a causa di anticorpi marcati in modo fluorescente che aiutano a identificare proteine o ligandi che si legano alle cellule associate.
Figura 01: Citometria a flusso
Generalmente, la citometria a flusso comprende principalmente tre sottosistemi. Sono la fluidica, l'elettronica e l'ottica. Nella citometria a flusso sono disponibili cinque componenti principali che vengono utilizzati nell'ordinamento cellulare. Si tratta di una cella a flusso (un flusso di liquido che viene utilizzato per trasportarli e allineare le celle per il processo di rilevamento ottico), un sistema di misurazione (può essere di diversi sistemi tra cui lampade al mercurio e allo xeno, raffreddato ad acqua o laser a bassa potenza raffreddati ad aria o laser a diodi), un ADC; Sistema di conversione da analogico a digitale, sistema di amplificazione e un computer per l'analisi. L'acquisizione è il processo mediante il quale i dati vengono raccolti dai campioni utilizzando il citometro a flusso. Questo processo è mediato da un computer collegato al citometro a flusso. Il software presente nel computer analizza le informazioni fornite al computer dal citometro a flusso. Il software ha anche la capacità di regolare i parametri dell'esperimento controllando il citometro a flusso.
Cos'è FACS?
Nel contesto della citometria a flusso, l'ordinamento cellulare attivato dalla fluorescenza (FACS) è un metodo utilizzato per differenziare e selezionare un campione di una miscela di cellule biologiche. Le celle sono separate da due o più contenitori. Il metodo di smistamento si basa sulle caratteristiche fisiche della cellula che include la diffusione della luce e le caratteristiche di fluorescenza della cellula. Questa è un'importante tecnica scientifica, che può essere utilizzata per ottenere risultati quantitativi e qualitativi affidabili dei segnali di fluorescenza emessi da ciascuna cellula. Durante FACS, inizialmente, la miscela di cellule pre-ottenuta; una sospensione è diretta al centro di uno stretto flusso di liquido che scorre rapidamente. Il flusso del liquido è progettato in modo da separare le celle nella sospensione in base al diametro di ciascuna cella. Un meccanismo di vibrazione viene applicato al flusso di sospensione che provoca la formazione di singole goccioline.
Figura 02: FACS
Il sistema è calibrato in modo da creare una singola goccia con una cella. Poco prima della formazione delle goccioline, la sospensione di flusso si muove lungo un apparecchio di misurazione della fluorescenza che rileva la fluorescenza caratteristica di ciascuna cellula. Nel punto di formazione delle goccioline, viene posizionato un anello di carica elettrica a cui viene indotta una carica sull'anello prima della misurazione dell'intensità della fluorescenza. Una volta che le goccioline si sono formate dal flusso di sospensione, una carica viene intrappolata all'interno delle goccioline che poi entra in un sistema di deflessione elettrostatica. Secondo l'addebito, il sistema devia le goccioline in contenitori diversi. Il metodo di applicazione della carica varia a seconda dei diversi sistemi utilizzati in FACS. L'apparecchiatura utilizzata in FACS è nota come selezionatore cellulare attivato a fluorescenza.
Qual è la somiglianza tra citometria a flusso e FACS?
Citometria a flusso e FACS sono stati sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche
Qual è la differenza tra citometria a flusso e FACS?
Citometria a flusso vs FACS |
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| La citometria a flusso è una metodologia utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule in base a diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. | FACS è un processo mediante il quale una miscela di campioni di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. |
Riepilogo – Citometria a flusso vs FACS
La cellula è l'unità strutturale e funzionale di base di tutti gli organismi viventi. L'ordinamento cellulare è il processo mediante il quale le cellule vengono isolate e differenziate in diverse categorie in base alle loro proprietà intracellulari ed extracellulari. Citometria a flusso e FACS sono due metodologie importanti nell'ordinamento cellulare. Entrambi i processi sono sviluppati per differenziare le cellule in base alle loro proprietà ottiche. La citometria a flusso è una metodologia utilizzata durante l'analisi di una popolazione eterogenea di cellule in base a diverse molecole di superficie cellulare, dimensioni e volume che consente l'indagine di singole cellule. FACS è un processo mediante il quale una miscela di campioni di cellule viene ordinata in base alle loro caratteristiche di diffusione della luce e fluorescenza in due o più contenitori. Questa è la differenza tra citometria a flusso e FACS.
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