Differenza chiave – YAC vs M13 Phage Vector
La clonazione del DNA è un processo importante che consente la propagazione di importanti frammenti di DNA di organismi. Richiede l'unione di DNA specifico con DNA vettore per creare DNA ricombinante che si trasforma nell'organismo ospite. Un vettore è una molecola di DNA che si comporta come un veicolo per trasportare materiale genetico estraneo in un' altra cellula o organismo. Dovrebbe essere in grado di replicarsi all'interno dell'organismo ospite e produrre più copie di DNA ricombinante. Esistono diversi tipi di vettori utilizzati nella clonazione del DNA. Il cromosoma artificiale del lievito (YAC) e il vettore fagico M13 sono due tipi tra loro. La differenza chiave tra il vettore fagico YAC e M13 è quello YAC è un cromosoma artificiale che si replica nelle cellule di lievito mentre il vettore fagico M13 è un DNA circolare a filamento singolo del batteriofago M13 che si replica nelle cellule E Coli.
Cos'è un vettore YAC?
YAC è un cromosoma costruito artificialmente che ha la capacità di trasportare un ampio segmento di DNA estraneo e di replicarsi all'interno delle cellule di lievito. Ha centromero, telomero e sequenze di replicazione autonoma essenziali per la replicazione e la stabilità. YAC dovrebbe anche recare un marcatore selettivo o marcatori e siti di restrizione per renderlo un vettore di clonazione efficace. Sequenze di grandi dimensioni che vanno da 1000 kb a 2000 kb possono essere inserite in YAC e trasferite nel lievito.
Figura 01: vettore YAC
Cos'è il vettore dei fagi M13?
Il batteriofago M13 è un virus che infetta e si replica in E Coli. Il genoma del batteriofago M13 è di piccole dimensioni, circa 6,7 kb. È un DNA a singolo filamento, circolare e di senso positivo. Questo virus infetta specificamente i batteri E Coli attraverso F pilus. Una volta che entra nell'ssDNA nel batterio, sintetizza il suo filamento complementare e diventa dsDNA o la forma replicativa (RF) di M13. RF può comportarsi come un plasmide all'interno dell'organismo ospite. Il dsDNA si replica all'interno di E Coli e produce ssDNA recante nuovi fagi. Questi nuovi fagi vengono continuamente rilasciati dall'E Coli senza uccidere la cellula ospite. Tuttavia, l'infezione rallenta la crescita di E Coli. dsDNA può essere estratto da cellule batteriche e utilizzato come vettori nella clonazione del DNA. Sono conosciuti come vettori fagici M13. Possono essere facilmente manipolati e usati in modo simile ai vettori plasmidici.
La capacità intrinseca di infezione di questi fagi M13 serve come una buona qualifica per essere usati come vettori nella clonazione genica. Quando si sviluppa M13 in un vettore, diversi elementi dovrebbero essere incorporati nel suo genoma. Sono un gene per la proteina lac repressor (lac I), la regione prossimale dell'operatore del gene lac Z, un promotore lac e un sito di clonazione multiplo (polylinker). Quando il dsDNA di M13 viene utilizzato come vettori, può essere trattato come un vettore plasmidico. Tuttavia, l'uso di ssDNA M13 presenta vantaggi nel sequenziamento del DNA e nella mutagenesi sito-diretta.
Poiché il vettore fagico M13 ha più siti di clonazione nella regione lacZ, i vettori ricombinati possono essere facilmente identificati dallo screening delle colonie blu/bianco su piastre di agar contenenti IPTG e X-Gal. Le placche blu prodotte sulle piastre non contengono i fagi ricombinati. Pertanto, i fagi con inserti possono essere selezionati per lo scopo della clonazione.
Figura 02: Batteriofago M13
Qual è la differenza tra YAC e M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
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| YAC è un cromosoma geneticamente modificato che ha la capacità di trasportare un ampio segmento di DNA estraneo e di replicarsi all'interno delle cellule di lievito. | Il vettore fagico M13 è un vettore virale sviluppato dal batteriofago M13 che viene utilizzato per inserire DNA estraneo in E Coli. |
| Scopo | |
| Gli YAC sono stati progettati per clonare grandi frammenti di DNA genomico nel lievito. | I vettori fagici M13 vengono utilizzati per inserire DNA estraneo in E Coli. |
| Inserisci lunghezza | |
| Gli YAC possono contenere inserti genomici di dimensioni megabase (1000 kb – 2000 kb). | La dimensione degli inserti è di circa 1.500 bps. |
| Costruzione | |
| Il DNA YAC è difficile da purificare intatto e richiede un'elevata concentrazione per generare il sistema vettore YAC. | Si verifica tramite una catena di elettroni fotosintetici ciclici. |
| Stabilità | |
| YAC è instabile. | I fagi M13 possono essere facilmente estratti. |
| Taglia | |
| Gli enzimi sono molecole più grandi. | I fagi M13 sono stabili rispetto a YAC. |
Riepilogo – YAC vs M13 Phage Vector
YAC è un sistema vettoriale costruito artificialmente che utilizza una specifica regione del cromosoma di lievito per inserire ampi segmenti di materiale genetico nelle cellule di lievito. Il vettore fagico M13 è un sistema vettoriale derivato dal batteriofago M 13 che utilizza E coli come organismo ospite. Questa è la principale differenza tra YAC e M13 Phage Vector. Entrambi sono ugualmente utili nella tecnologia del DNA ricombinante e nella clonazione dei geni.
