La differenza fondamentale tra il test colorimetrico e quello fluorimetrico è che il test colorimetrico determina la concentrazione di composti colorati in una soluzione mentre il test fluorimetrico determina il meccanismo cinetico di una soluzione.
Un test biochimico è una tecnica che rileva o quantifica analiticamente l'attività di una molecola o sostanza biologica. È un processo in vitro. Il test colorimetrico e il test fluorometrico sono due tipi di test biochimici comuni eseguiti nei laboratori. Tecniche multiple come ELISA e western blotting sono anche saggi biochimici complessi per la quantificazione dell'attività metabolica e la misurazione del comportamento funzionale di biomolecole come proteine, enzimi e altre piccole molecole. Questi tipi di test vengono utilizzati per l'identificazione delle interazioni proteina-DNA, proteina-RNA e proteina-proteina.
Cos'è un test colorimetrico?
Un test colorimetrico è una tecnica che determina la concentrazione di composti colorati in una soluzione. In altre parole, il test colorimetrico è una reazione che porta a un cambiamento di colore dovuto a una reazione enzimatica o chimica tra reagenti e analiti. I saggi colorimetrici sono praticati in biochimica per testare enzimi, composti specifici, ormoni, anticorpi e altri analiti. Usano colorimetri o spettrofotometri. I colorimetri sono strumenti che caratterizzano i campioni colorati al fine di fornire una misura oggettiva delle caratteristiche del colore. Uno spettrofotometro è un dispositivo che misura l'intensità della luce in funzione del colore o della lunghezza d'onda della luce.
Figura 01: test colorimetrico
Come funziona un test colorimetrico?
In un test colorimetrico, viene preparata una piastra con un particolare anticorpo legato ai pozzetti. Quindi viene aggiunto il campione. Ciò può consentire al campione di legarsi all'anticorpo. Quindi un anticorpo di rilevamento e un substrato vengono aggiunti ai pozzetti per reagire con la sonda di rilevamento. La soluzione di arresto viene aggiunta alla fine prima della lettura. Un pozzetto vuoto chiamato bianco viene lasciato senza il campione. Nel test colorimetrico, più scuro è il colore, maggiore è la concentrazione di analita. Di solito, è necessaria solo una lunghezza d'onda per eseguire la lettura. Ma se esiste una misurazione di riferimento, vengono utilizzate due o più lunghezze d'onda.
Cos'è un test fluorometrico?
Il test fluorometrico è una tecnica che determina il meccanismo cinetico delle reazioni enzimatiche. Un test fluorimetrico avviene con la formazione di un prodotto fluorescente da un substrato non fluorescente o viceversa. Questo test utilizza anche il trasferimento di energia di risonanza della fluorescenza (FRET) dove la reazione enzimatica cambia la posizione di due fluorofori nel substrato, cambiando così l'intensità della fluorescenza.
Figura 02: test fluorometrico
I saggi fluorometrici sono generalmente molto più sensibili di altri saggi. Le stime diagnostiche degli enzimi nei campioni di tessuto, cellule o fluidi dei pazienti aumentano a causa della sua maggiore sensibilità.
Come funziona un test fluorometrico?
In un test fluorometrico, un substrato viene aggiunto al campione nella piastra e la risposta alla fluorescenza viene rilevata utilizzando il lettore di piastre. Qui, ogni cella viene misurata separatamente. Le piastre opache vengono utilizzate nei test fluorometrici. Ciò riduce la dispersione della luce. Per questo tipo di analisi sono necessarie due lunghezze d'onda. Una lunghezza d'onda serve per rilevare l'eccitazione e l' altra per l'emissione.
Quali sono le somiglianze tra il test colorimetrico e quello fluorometrico?
- Il test colorimetrico e il test fluorometrico sono due tipi di test biochimici.
- Entrambi i test vengono eseguiti per la diagnostica medica.
- Questi test comportano una reazione enzimatica.
- Entrambi i saggi coinvolgono un substrato e analiti.
Qual è la differenza tra il test colorimetrico e quello fluorometrico?
Un test colorimetrico è una tecnica che determina la concentrazione di composti colorati in una soluzione, mentre il test fluorimetrico è una tecnica che determina il meccanismo cinetico delle reazioni enzimatiche. Quindi, questa è la differenza chiave tra il test colorimetrico e quello fluorimetrico. Inoltre, i saggi fluorometrici sono più sensibili dei saggi colorimetrici; quindi, i saggi fluorometrici hanno la capacità di rilevare più analiti. Pertanto, questa è un' altra importante differenza tra il test colorimetrico e quello fluorimetrico. Inoltre, i test fluorometrici richiedono due lunghezze d'onda, mentre i test colorimetrici vengono eseguiti con una lunghezza d'onda.
L'infografica di seguito elenca più differenze tra il test colorimetrico e quello fluorimetrico.
Riepilogo – Test colorimetrico vs fluorometrico
Un test biochimico è un processo analitico utilizzato per determinare e quantificare le reazioni metaboliche cellulari. Il test colorimetrico e il test fluorometrico sono due tipi di test biochimici. Il test colorimetrico è una reazione che porta a un cambiamento di colore dovuto a una reazione enzimatica o chimica tra reagenti e analiti mentre il test fluorimetrico è una tecnica utilizzata per determinare il meccanismo cinetico delle reazioni enzimatiche. Entrambi i test dipendono da una reazione enzimatica che coinvolge un substrato e un analita. I test fluorometrici sono più sensibili dei test colorimetrici. Ancora più importante, i test fluorometrici richiedono due lunghezze d'onda, mentre i test colorimetrici possono essere eseguiti con una sola lunghezza d'onda. Pertanto, questo riassume la differenza tra il test colorimetrico e quello fluorimetrico.
