Differenza chiave – Phusion vs Taq Polimerasi
Le DNA polimerasi sono enzimi ampiamente utilizzati nelle tecniche di biologia molecolare e sono anche naturalmente presenti in tutti gli organismi che subiscono la replicazione del DNA. Sono gli enzimi polimerizzanti chiave che coinvolgono durante la replicazione. La DNA polimerasi è in grado di aggiungere nucleotidi all'estremità 3' libera del filamento di DNA causando così l'estensione di un nuovo filamento. Attualmente, a causa degli sviluppi della biologia molecolare nella diagnostica delle malattie e nelle applicazioni industriali, è importante produrre polimerasi aventi diverse proprietà benefiche. Ciò aumenta la precisione del metodo e lo rende una tecnica più rapida. Phusion e Taq polimerasi sono due enzimi polimerasi termostabili prodotti in commercio che vengono utilizzati in speciali applicazioni molecolari. Phusion è una DNA polimerasi isolata da Pyrococcus furiosus e viene utilizzata principalmente negli esperimenti di clonazione per aumentare la fedeltà. La Taq DNA polimerasi è la DNA polimerasi standard utilizzata nella reazione a catena della polimerasi (PCR) ed è isolata dal batterio termostabile; Thermus acquatico. La differenza chiave tra i due enzimi è il microrganismo di origine. Phusion è isolata dall'estremofilo, Pyrococcus furiosus, mentre la Taq polimerasi è isolata dal termofilo, Thermus aquaticus.
Cos'è Phusion?
Phusion DNA polimerasi è una nuova polimerasi prodotta isolando l'enzima dal Pyrococcus furiosus, che è un Archaea estremofilo. Questi microbi risiedono in condizioni di temperatura estremamente elevata, rendendo così la polimerasi una polimerasi altamente stabile al calore. La polimerasi a iniezione viene utilizzata per ottenere un'estrema fedeltà rispetto alla polimerasi termostabile convenzionale; Taq polimerasi. Phusion polimerasi è in grado di amplificare modelli lunghi fino a 7,5 kb di DNA genomico. La capacità di polimerizzazione ottimale della Phusion polimerasi è a 720 C. Phusion viene utilizzato anche nei prodotti di clonazione per il sequenziamento, l'analisi dell'espressione e l'analisi delle mutazioni.
Phusion DNA polimerasi ha l'attività esonucleasica 3'-5'. Ciò consente la correzione di bozze del filamento appena sintetizzato dopo la sintesi. Quindi, i disallineamenti dei nucleotidi possono essere facilmente riparati. Pertanto, ha un tasso di errore inferiore. I vantaggi complessivi della Phusion polimerasi sono;
- Estrema fedeltà
- Alta velocità e tempi di estensione ridotti
- Reazioni robuste e richiede un'ottimizzazione minima
- Alto rendimento
Figura 01: Phusion
Lo svantaggio principale della Phusion polimerasi è che è inibito in presenza di deossiuridina trifosfato (dUTP). Quando i dUTP si accumulano nella miscela di reazione, possono inibire le azioni della Phusion polimerasi. Ciò viene impedito trattando la miscela di reazione con dUTPase prima di aggiungere l'enzima. Al momento, come rimedio a questo problema, viene utilizzata una variante resistente al dUTP della polimerasi Phusion nota come Pfu Turbo al posto della polimerasi Phusion.
Cos'è la Taq Polimerasi?
L'invenzione della DNA polimerasi Taq ha rivoluzionato il campo della biologia molecolare. Ha risolto un grosso problema nell'amplificazione del DNA. La Taq DNA polimerasi è un enzima polimerasi termostabile estratto e isolato dal batterio termofilo Thermus aquaticus. La scoperta di questi enzimi porta allo sviluppo della PCR. Questo enzima ha consentito l'uso della reazione a catena della polimerasi nell'amplificazione del DNA invece delle laboriose tecniche di clonazione convenzionali. La PCR è ora utilizzata nella diagnostica molecolare, nei campi agricoli e industriali con molte nuove varianti aggiunte alla tecnica.
Figura 02: Taq Polimerasi
Taq DNA polimerasi funziona all'intervallo di temperatura ottimale compreso tra 720C – 800C. La Taq DNA polimerasi richiede un cofattore; magnesio per la sua funzione. La Taq polimerasi non ha la capacità di correzione di bozze 3'-5', quindi il tasso di errore della Taq DNA polimerasi è elevato rispetto a tipi più recenti di DNA polimerasi come la Phusion polimerasi ecc. Ma la popolarità della Taq DNA polimerasi rimane il lo stesso in tutto il mondo della scienza grazie alla comodità e alla flessibilità dell'enzima.
Quali sono le somiglianze tra Phusion e Taq polimerasi?
- Sia Phusion che Taq polimerasi sono enzimi polimerizzanti in grado di aggiungere nucleotidi all'estremità libera 3' del filamento di DNA.
- Sia Phusion che Taq polimerasi richiedono una sequenza di primer per iniziare la polimerizzazione.
- Sia Phusion che Taq polimerasi sono stabili al calore.
- Sia Phusion che Taq polimerasi sono utilizzate nei meccanismi della PCR per amplificare il DNA.
- Quando si aggiunge la polimerasi alla miscela di reazione, entrambe le polimerasi Phusion e Taq vengono aggiunte per ultime per garantire l'efficienza dell'enzima.
- Sia Phusion che Taq polimerasi sono sintetizzate commercialmente per scopi sperimentali di biologia molecolare.
- Sia Phusion che Taq polimerasi richiedono un cofattore per completare la sua funzione.
Qual è la differenza tra Phusion e Taq Polimerasi?
Phusion vs Taq Polimerasi |
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| Phusion è una DNA polimerasi isolata da Pyrococcus furiosus e viene utilizzata principalmente negli esperimenti di clonazione per aumentare la fedeltà. | Taq DNA polimerasi è la DNA polimerasi standard utilizzata nella reazione a catena della polimerasi (PCR) ed è isolata dal batterio termostabile Thermus aquaticus. |
| Organismo sorgente | |
| Phusion viene estratta dall'archeo estremofilo – Pyrococcus furiosus. | Queste opere letterarie vanno dal periodo della colonizzazione al periodo della decolonizzazione. |
| Abilità di lettura delle bozze | |
| 3' - 5' capacità di correzione di bozze è presente in Phusion. | 3' - 5' La capacità di lettura di bozze è assente nella Taq polimerasi. |
| Fedeltà | |
| L' alta fedeltà c'è con Phusion. | La Taq polimerasi mostra una bassa fedeltà. |
| Amplificazione | |
| Phusion è in grado di amplificare lunghi frammenti di DNA. | La Taq polimerasi è in grado di amplificare frammenti di DNA molto più corti. |
| dUTP Avvelenamento | |
| L'azione di spinta è inibita dall'accumulo dispari. | La Taq polimerasi non è inibita da dUPT. |
Riepilogo – Phusion vs Taq polimerasi
Phusion e Taq DNA polimerasi sono due polimerasi termostabili utilizzate nelle tecniche PCR. Phusion è una polimerasi isolata dall'estremofilo Pyrococcus furiosus mentre Taq è isolato dal batterio termostabile Thermus aquaticus. La scoperta della Taq DNA polimerasi porta all'invenzione della PCR. Phusion ha molti vantaggi rispetto a Taq che ha reso Phusion un'opzione migliore nella produzione di DNA ad alta fedeltà. Tuttavia, la Taq polimerasi è ancora utilizzata come enzima standard della polimerasi nella PCR. Questa è la differenza tra Phusion e Taq polimerasi.
