La differenza chiave tra lievito un ibrido e lievito due ibrido è che lievito un ibrido è un test in vitro per analizzare le interazioni DNA-proteine mentre lievito due ibrido è un test in vitro per analizzare le interazioni proteina-proteina.
Lo studio delle interazioni tra le molecole cellulari può aiutare a definire i siti di riconoscimento coinvolti nell'espressione genica e nei percorsi proteici. Le interazioni tra DNA e proteine sono parte integrante dei processi cellulari come le modifiche del DNA e la regolazione trascrizionale, ecc. D' altra parte, le interazioni tra proteine e proteine svolgono ruoli vitali nei processi cellulari come la replicazione, la trascrizione, la traduzione e la trasduzione del segnale. Pertanto, è di fondamentale importanza identificare queste interazioni di molecole cellulari attraverso diversi saggi. Lievito un ibrido e lievito due ibridi sono due test in vitro per analizzare le interazioni DNA-proteina e proteina-proteina.
Cos'è Yeast One Hybrid?
Yeast one hybrid (Y1H) è un test in vitro per analizzare le interazioni intracellulari di DNA-proteina. Questo metodo è stato stabilito per la prima volta da Wang e Reed nel 1993. Da allora, ha mostrato un maggiore potere nella ricerca biologica. In questo test, ci sono due componenti principali: esca del DNA e prede proteiche.
Figura 01: Yeast One Hybrid
Nella procedura, una sequenza di DNA (DNA bait) viene prima clonata a monte di due diversi reporter (HIS3, LacZ). Questi costrutti reporter sono integrati nel genoma di un ceppo di lievito. I fattori trascrizionali sono presi come prede proteiche. I fattori trascrizionali sono fusi al dominio di attivazione trascrizionale (AD) del fattore trascrizionale Gal4 del lievito per creare proteine ibride. L'intera proteina ibrida viene integrata in un plasmide prima di introdurla nel ceppo di lievito. Dopo l'introduzione del plasmide ricombinante, quando il fattore trascrizionale interagisce con il frammento di DNA, la parte AD attiva l'espressione genica reporter (HIS3 o LacZ). Il sequenziamento dei plasmidi consente l'identificazione del fattore trascrizionale che può legarsi al frammento di DNA. Recentemente, il metodo ibrido del lievito è stato utilizzato per ricercare la diagnosi delle malattie. Pertanto, in futuro, questo test sarà più ampiamente utilizzato nella ricerca scientifica e nei trattamenti medici.
Cos'è Yeast Two Hybrid?
Yeast two hybrid (Y2H) è un test in vitro per analizzare le interazioni intracellulari di proteine e proteine. Questo metodo è stato originariamente trovato da Stanley Fields e Ok-Kyu Song nel 1989. Questa tecnica rileva le interazioni proteina-proteina utilizzando il fattore di trascrizione Gal4 del lievito.
Figura 02: Yeast Two Hybrid
In questo metodo, vengono prima costruite due fusioni (ibridi) utilizzando proteine di interesse: fondendo una proteina con il dominio di legame del DNA (DBD) e fondendo l' altra proteina con il dominio attivatore (AD) del fattore di trascrizione Gal4. La proteina fusa con il DBD è nota come esca mentre la proteina fusa con l'AD è nota come preda. Nel ceppo di lievito, sull'interazione dell'esca e della preda, il DBD e l'AD vengono avvicinati per generare un fattore di trascrizione Gal4 funzionale a monte del gene reporter. Il fattore di trascrizione funzionale attiva l'espressione genica reporter. Inoltre, questo metodo è attualmente utilizzato per schermare le interazioni delle proteine integrali della membrana nelle cellule dei mammiferi.
Quali sono le somiglianze tra Yeast One Hybrid e Yeast Two Hybrid?
- Lievito uno ibrido e lievito due ibridi sono due test in vitro per analizzare le interazioni DNA-proteina e proteina-proteina.
- Questi test utilizzano ceppi di lievito.
- Entrambi i saggi utilizzano il dominio di attivazione (AD) del fattore di trascrizione Gal4.
- Usano l'espressione del gene reporter (HIS3 o LacZ) per rilevare le interazioni.
- Hanno esche e prede.
- Entrambi i saggi sono molto utili nella moderna ricerca biologica.
Qual è la differenza tra Yeast One Hybrid e Yeast Two Hybrid?
Yeast one hybrid è un test in vitro per analizzare le interazioni tra DNA e proteine, mentre lievito two hybrid è un test in vitro per analizzare le interazioni tra proteine e proteine. Quindi, questa è la differenza chiave tra lievito un ibrido e lievito due ibridi. Inoltre, nel lievito un ibrido, l'esca è un frammento di DNA e la preda è una molecola proteica. D' altra parte, nel lievito due ibridi, sia l'esca che la preda sono molecole proteiche.
L'infografica di seguito elenca le differenze tra lievito un ibrido e lievito due ibridi in forma tabellare per un confronto fianco a fianco.
Riepilogo – Yeast One Hybrid vs Yeast Two Hybrid
Lievito uno ibrido e lievito due ibridi sono due importanti test in vitro. Yeast one hybrid è un test in vitro per analizzare le interazioni tra DNA e proteine, mentre lievito two hybrid è un test in vitro per analizzare le interazioni tra proteine e proteine. Quindi, questa è la differenza chiave tra lievito un ibrido e lievito due ibridi.
